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蛋白酶Corin 与妊娠期高血压疾病的研究 中文摘要 蛋白酶Corin 与妊娠期高血压疾病的研究 中文摘要 妊娠期高血压疾病严重影响母婴健康，是孕产妇及围生儿发病及死亡的主要原因 之一。近来研究发现，抗血管生成因子sFlt-1，sEng 的升高，促血管生成因子胎盘生 长因子（PlGF ）的下降可能参与妊娠期高血压疾病的形成及进展。我们课题组研究发 现Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶Corin 在调节高血压和心功能方面有非常重要的作用，与高 血压、心肌肥厚及心力衰竭的发病有关。妊娠期高血压疾病为高血压的特殊类型，有 研究表明Corin 可能在妊娠高血压发病中起作用。 目的：以妊娠期高血压疾病患者为研究对象，通过检测育龄女性血浆Corin 水平 及血管生成因子，分析血浆中可溶性Corin 与妊娠期高血压疾病的关系，并对妊娠期 高血压疾病疾病患者Corin 基因进行分析，发现与疾病相关的基因突变，探讨妊娠期 高血压发病的分子机制，并为妊娠期高血压疾病的诊断提供新方法。 方法： 1、应用酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA ）检测实 验组及对照组共计456 人血浆中Corin、sEng、sFlt-1、PlGF 、sFlt-1/PlGF 水平。 2 、对子痫前期患者Corin 基因进行测序，通过Chromas 软件将测序结果与Corin 基因序列NM_006587.2 进行比对。根据检测到的突变位点，采用定点突变的方法构 建突变质粒K317E-Corin 。 3 、将野生型质粒 wt-Corin 及 Corin 突变体转染 HEK293 细胞及稳定表达人 pro-ANP 重组蛋白的HEK293 细胞，收集上清及裂解液,通过Western blot 分析突变体 K317E 突变对Corin 的表达及功能的影响。 结果： 1、血浆中可溶性 Corin 水平，妊娠女性显著高于正常未孕组；妊娠组中，子痫 前期组显著高于正常孕妇（1.31 ± 0.06 vs 0.95 ± 0.03 ng/mL, p0.001 ）；单纯妊娠期高 血压组及单纯蛋白尿组分别为1.07 ± 0.04 ng/mL 和1.25 ± 0.06 ng/mL，单纯蛋白尿组 显著高于正常妊娠组（p 0.001 ）。 II 蛋白酶Corin 与妊娠期高血压疾病的研究 中文摘要 2 、子痫前期患者组，血浆PlGF 值显著低于正常育龄孕妇组（39.1 ±9.2 vs 96.0 ± 10.0 pg/mL ，p=0.001 ），血浆sFlt-1 值显著高于正常育龄孕妇组（16.0 ± 1.5 vs 8.4 ±0.4 ng/mL, p0.001 ），sFlt-1/PlGF 比率显著高于正常育龄孕妇组（1352.5 ±236.0 vs 261 ± 25.9, p0.001 ），血浆sEng 值显著高于正常育龄孕妇组（17.6 ±0.5 vs 14.9 ±0.3 ng/mL ， p0.001 ）。 3、对子痫前期患者组 Corin 基因进行测序分析，发现其中一患者的第七号外显 子出现改变，致使Corin 蛋白317 号氨基酸由赖氨酸K 变为谷氨酸E, 即K317E 。在 其他患者及正常人中未发现此改变，认定其为基因突变。 4 、将野生型Corin （wt-Corin ）及K317E 表达载体转染HEK293 细胞或稳定表 达人pro-ANP 的HEK293 细胞，发现K317E 表达量未受明显影响，但活化pro-ANP 为ANP 的能力降至wt-Corin 的366% 。 结论： 1、血浆可溶性 Corin 在子痫前期患者中显著升高，提示可作为诊断该病的分子 标志。 2 、在子痫前期患者发现Corin 的基因突变，使第317 号氨基酸由赖氨酸K 变为 谷氨酸E （K317E ），该突变国内外未见报道，为新发现的基因突变。 3、体外细胞实验研究显示，K317E 突变影响Corin 的活化及对pro-ANP 的剪切 能力，是