固相萃取高效液相色谱荧光检测土壤中喹诺酮类抗生素_临床医学论文.docVIP

固相萃取高效液相色谱荧光检测土壤中喹诺酮类抗生素_临床医学论文 固相萃取高效液相色谱荧光检测土壤中喹诺酮类抗生素_临床医学论文 作者：邰义萍 莫测辉 李彦文 包艳萍 张艳 姚圆 罗晓栋 【摘要】 建立了固相萃取高效液相色谱荧光(HPLC检测土壤中4种喹诺酮类抗生素的分析方法。样品采用50% Mg(NO3)2（96∶4，V/V）超声提取，过HLB柱富集净化，再用乙腈溶液洗脱。采用高效液相色谱荧光检测器，以乙腈用三乙胺调节至pH 2.5)为流动相，于激发波长280 nm、发射波长450 nm处进行检测。土壤样品中4种喹诺酮类抗生素的加标回收率在60.4%～99.3%之间，检出限为0.58～1.0 μg/kg。对蔬菜基地土壤样品分析结果表明，本方法能够满足实际样品的分析要求，4种喹诺酮类抗生素均被检出，土壤中抗生素污染问题值得关注。 【关键词】 土壤， 喹诺酮类抗生素， 固相萃取， 高效液相色谱， 荧光检测 　　1 引言 　　喹诺酮类抗生素(QNs)大量用于人类和动物医疗，还添加于饲料中以提高饲料利用率和促进动物生长[1,2]。抗生素摄入后大部分（gt;85%）以原药和代谢产物的形式随粪尿排出体外[1]，成为新的环境污染物，并以多种途径进入土壤。其中人用抗生素在城市污水中的浓度高达10－５ g/L[3]，在污水处理过程中其去除率通常较低[4]，导致大量抗生素进入地表水，造成河流抗生素污染[5]，并通过灌溉水进入农业土壤[6]。规模化养殖场畜禽废物（粪尿）中抗生素的浓度高达0.01～0.1 g/kg水平[7]，并作为有机肥广泛用于农业生产，每年由此输入土壤中抗生素的数量甚至不亚于农药，从而导致土壤抗生素污染，并引发水体污染，产生耐药性，危及生态安全和人体健康[8，９]。 　　近年来，喹诺酮类抗生素在水体、土壤和畜禽废物中被普遍检出[９，10]，但在环境中主要以痕量存在，在水体中含量通常为10－8g/L水平[1１]，在养殖场附近底泥中含量可达10－4g/kg水平[１２]。目前，主要采用液相色谱质谱联用(HPLC分析环境中喹诺酮类抗生素[９，1０，１３]。因仪器昂贵而难以普及，且主要是针对水体进行分析。虽然肉奶蛋等动物性食品中抗生素残留的高效液相色谱分析方法已成熟且有相关标准，但由于土壤与动物性食品间的性质差异很大，且土壤中杂质更为复杂。因此，不能直接采用食品中的提取净化方法来分析土壤中的抗生素。目前，利用高效液相色谱仪分析土壤中喹诺酮类抗生素的报道很少，检测的化合物种类少[１４]，或是以灵敏度欠佳的紫外光来进行检测[１５]。为此，本研究建立了有效价廉的高效液相色谱荧光同时测定土壤中4种喹诺酮类抗生素的分析方法。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SHZ恒温震荡器；KQ超声波清洗器；24管固相萃取装置；HLB固相萃取柱(3 mL， 60 mg），Supelco公司)；C18固相萃取柱(3 mL， 500 mg），Supelco公司)；雷磁PHS精密pH计；氮吹仪。 　　4种喹诺酮类抗生素：诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、洛美沙星(LOM)和恩诺沙星(ENR)，（纯度＞98.0%，德国Ｄr. Ehrenstorfer公司）。甲醇和乙腈（色谱纯，Sigma公司）；其余试剂均为分析纯；实验用水为高纯水。 　　标准品母液：准确称取4种喹诺酮类抗生素标准品各0.0100 g, 溶入0.05 mol/L NaOH溶液，并用高纯水稀释定容至100 mL，配制成浓度为100 mg/L的工作母液，在4 ℃下避光保存。50% Mg(NO3)2溶液：称取50g Mg(NO3)2·6H2O溶于100 mL高纯水，室温保存。10% NH3·H2O将２５％的氨水用水稀释１０部，现配现用。0.067 mol/L H3PO4/三乙胺溶液(pH 2.5)：取5 mL H3PO4，加高纯水稀释至1000 mL，滴加三乙胺调pH至2.5。 2.2 样品预处理 称取1.00 g粉碎后风干过0.30 mm孔径筛的土壤样品于10 mL离心管中，加入50%Mg(NO3)2（96∶4， V/V） 5 mL，振荡5 min，超声提取15 min，离心（4500 r/min）5 min，收集上清液。残渣再用上述方法反复提取2次。合并提取液，过HLB固相萃取小柱（小柱先后用6 mL甲醇、6 mL水进行预处理）萃取富集。用6 mL高纯水清洗小柱，真空干燥10 min，再用3 mL乙腈溶液(5∶1， V/V)洗脱小柱。洗脱液在40 ℃水浴下用氮气吹至近干，用流动相定容至1 mL，溶液过0.22 μm膜，收集滤液于样品瓶中待测。 　　2.3 色谱条件 　　Waters色谱柱(250 mm×4.6 mm， 5 μm)