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人参皂苷Rg1、Rb1对淀粉样前体蛋白分泌酶代谢途径的影响_临床医学论文 人参皂苷Rg1、Rb1对淀粉样前体蛋白分泌酶代谢途径的影响_临床医学论文 作者：魏翠柏,贾建平,王芬,贾龙飞 【摘要】 目的 观察人参皂苷Rg1、Rb1对淀粉样前体蛋白代谢途径中α分泌酶活性和基因表达的影响。方法 用转染突变型PS1(ML46L)和野生型PS1的CHO细胞,通过荧光酶标技术检测α分泌酶活性,Western blot免疫印迹、RT-PCR技术检测α分泌酶基因ADAM9、ADAM10的蛋白和RNA表达。结果 转染突变型PS1 ML46L组α分泌酶活性较转染野生型PS1(WT组)低(0.05),加用人参皂苷Rg1、Rb1后转染突变型PS1ML46L组α分泌酶活性较未加用组不同程度增高(0.05),同时ADAM9、ADAM10的蛋白及RNA表达较未加用组有不同程度增多(0.05)。结论 人参皂苷Rg1、Rb1均可不同程度增加α分泌酶中ADAM9、ADAM10基因表达,提高α分泌酶活性,且人参皂苷Rg1调节作用优于人参皂苷Rb1。 【关键词】 人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；淀粉样前体蛋白分泌酶；阿尔茨海默病 　　Key words：Ginsenoside Rg1；Ginsenoside Rb1；secretase of amyloid precursor protein；Alzheimer’s Disease β-淀粉样蛋白(beta-amyloid protein,Aβ)在细胞外沉积构成的老年斑是阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)主要病理学特征之一。Aβ由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)经α和β两种分泌酶裂解产生。有效地调整分泌酶活性和功能是防治AD的重要途径。 人参皂苷Rg1、Rb1是人参的主要有效成分。有报道,人参皂苷Rg1、Rb1具有抗氧化、抑制凋亡、抗兴奋性氨基酸毒性及有效抑制细胞外APP增多诱导的细胞凋亡等多种保护作用[1-2]。本研究拟研究人参皂苷Rg1、Rb1对APP代谢中分泌酶的影响,进一步探讨人参皂苷Rg1、Rb1对AD可能的防治作用。 　　1 实验材料 　　1.1 细胞来源及培养 突变型PS1ML46L和野生型APP751双转染细胞系(PS1ML46L/APP751)、野生型PS1和野生型APP751双转染中国仓鼠卵巢瘤细胞系(TW组)、中国仓鼠卵巢瘤细胞系(CHO)由美国哈佛大学医学院神经疾病研究中心构建,经中国医学科学院基础研究所梁平教授转赠。细胞均在37 ℃含有5%CO2的饱和湿度下培养,CHO细胞系培养用高糖DMEM,加入20%FBS,其中PS1ML46L/APP细胞培养基外加250 μg/mL G418、2.5 μg/mL Puromycin。 　　1.2 试剂及药物 天然药物单体标准品人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1均购自中国药品生物制品检定所。ADAM9小鼠抗人单克隆抗体(批号ENM0139091)、ADAM10小鼠抗人单克隆抗体(批号FAL02)均购于美国RD公司。辣根过氧化物酶(HRP)耦联羊抗小鼠二抗和羊抗兔二抗(批号73452)。RT-PCR试剂盒(批号18080-051)购于美国Invitrogen公司。总RNA提取试剂盒(批号18341)购于美国Promega公司。α分泌酶活性检测试剂盒(批号FP001)为美国Ramp;D生物公司出品。 　　2 实验方法 　　2.1 总RNA提取 按照RNAgents Total RNA Isolation System(Promega)试剂盒和superscriptTIM Ⅲ First-Strand Synthesis for RT-PCR试剂盒操作,提取总RNA并完成RT-PCR。Beta-actin扩增产物作为内参,所用引物由上海Sangon生物工程服务有限公司合成。引物的碱基序列及扩增的目的基因片段长度如下：①BACE1(上游：5’-AAG ATG TTC GGA ATG TGG GT-3’；下游：5’-CAG GGC TAC TAT GTG GAG ATG A-3’)。②ADAM9(上游：5’-AGT TCC TGG ACC CTG ATG C-3’；下游：5’-TTC TCC CGC AGA CCC GCT AC-3’)。③ADAM10(上游：5’-CAC TTG GCT TAT GTT CCT A-3’；下游：5’-CTG CTT GGC CTA TGT CTT C-3’)。用Fluochemy5500凝胶图像分析仪采集图像,经Image Master TMTotal Lab Software图像分析软件计算条带光密度值。 　　2.2 α分泌酶活性荧光酶标测试 按照α