子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响_临床医学论文.docVIP

子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响_临床医学论文 子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响_临床医学论文 [摘要]　　目的：采用子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养，观察其对早期胚胎体外发育的影响。方法：对小鼠子宫内膜上皮细胞进行分离、培养鉴定，然后与体外受精的小鼠胚胎进行共培养，观察共培养对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。结果：与无上皮细胞相比，共培养明显促进了小鼠桑椹胚率（71.3%和61.2%，0.05），囊胚率（50.0%和39.7%，0.05），囊胚孵化率（34.8%和24.3%，0.05）和胚胎总细胞数（44.1和35.6，0.05）。结论：子宫内膜上皮细胞能够促进小鼠胚胎的体外发育，对早期胚胎的体外发育环境具有优化作用。 　　[关键词]　　子宫内膜上皮细胞；共培养；体外受精；小鼠 　　Effects of Coculture of Mouse Embryo with Endometrial Epithelial Cells on Early Mouse Embryonic Development 　　 　　Abstract:Objective To observe the effects of coculture of mouse embryo with endometrial epithelial cells on early embryonic development in vitro.Methods Mouse endometrial epithelial cells were isolated and cultured,then it was cocultured with mouse embryos fertilized in vitro. The percentage of embryo cleavage, blastocyst hatching and total cell number of blastocyst were observed. Results Coculture with endometrial epithelial cells could promote the formation of mouse morula (71.3% and 61.2%,0.05) and blastocyst (50.0% and 39.7%,0.05), and increase the blastocyst hatched rate (34.8% and 24.3%,0.05) and total cell number of blastocyst (44.1 and 35.6, 0.05).Conclusion Coculture with endometrial epithelial cells can facilitate the development of early mouse embryo in vitro, which can optimize the condition of embryonic development in vitro. 　　Key word: Endometrial epithelial cells;Coculture;In vitro fertilization;Mouse 　　早期胚胎发育是一个极其复杂的过程，受到多种因素的影响。在生殖医学等多个领域，胚胎体外培养技术已得到很大的提高，胚胎与体细胞共培养因其能够克服体外发育阻滞、提高移植后胚胎着床率[1]等优势而成为一种有效的胚胎体外培养途径。共培养的方法很多，其中以采用雌性生殖道细胞的效果最佳[2,3]。为进一步研究体细胞对胚胎体外发育环境的影响，本实验采用小鼠子宫内膜上皮细胞和早期胚胎进行共培养，观察其对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。 　　1　　材料与方法 　　1.1　　材料 　　1.1.1　　实验动物:15只20 g的昆明雌性小鼠购于中国科学院遗传与发育所实验动物中心。实验动物房光、暗周期均为12 h，饲养温度为24 ℃~26 ℃，自由采食饮水。 　　1.1.2　　试剂:DMEM培养基（Gibco公司）；胎牛血清（FBS,杭州四季青公司）；孕马血清促性腺激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）(宁波激素制品厂)；兔抗人角蛋白多克隆抗体（Novocastra公司）；生物素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(Zymed公司);实验中其余所用化学药品和试剂购自Sigma公司。 　　1.2　　方法 　　1.2.1　　小鼠子宫内膜上皮细胞的分离培养:根据Wegner[4]等人报道的方法从小鼠子宫组织中分离上皮细胞。