导痰汤对大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子-1的影响_临床医学论文.docVIP

导痰汤对大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子-1的影响_临床医学论文 导痰汤对大鼠脑血管内皮细胞细胞间粘附分子-1的影响_临床医学论文 作者：陈文强　李宗信　黄小波　王宁群　李斌 【摘要】 ：目的 对导痰汤干预脑血管内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达进行研究。方法 通过脑血管内皮细胞培养,采用免疫组织化学方法观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)在不同时程(0～24 h)对内皮细胞ICAM-1表达的影响,以及导痰汤的干预情况。结果 随着TNF-α作用时程增加,内皮细胞ICAM-1表达显著上调,呈时间依赖性,0.05。预先使用导痰汤处理内皮细胞后,ICAM-1表达无显著性变化,与模型组比较,0.05。结论 导痰汤能对不同时程的TNF-α诱导ICAM-1高表达发挥抑制作用。 【关键词】 导痰汤　脑血管内皮细胞　细胞间粘附分子-1　大鼠 　　Abstract：Objective To study the intervention of Daotan Decoction to the expression of ICAM-1 in cerebrovascular endothelial cells. Methods Cerebrovascular endothelial cells were cultured to observed the influence of ICAM-1 expression, which was induced by TNF-α, by the way of immunocytochemistry methods. Results Compared with control group, the expression of ICAM-1 in model group was time-dependent (0.05). And compared with model group, Daotan Decoction could significantly restrain ICAM-1 expression (0.05). Conclusion Daotan Decoction could restrain ICAM-1 expression induced by TNF-α in different phase. 　　Key words：Daotan Decoction；cerebrovascular endothelial cell；ICAM-1；rat　 单核细胞在血管内皮粘附并向内皮下迁移和泡沫化是动脉粥样硬化早期的病理过程[1]。细胞间粘附分子-1(ICAM-1)几乎参与了单核细胞粘附和迁移转化的全过程,促进和加速了脑动脉粥样硬化的发生和发展,与脑动脉硬化的发生、发展有重要关系[2]。由于ICAM-1作为表达于细胞表面的可诱导的糖蛋白,在脑动脉粥样硬化病理过程中起着重要的作用,因此,恰当地影响其表达可能对脑动脉粥样硬化具有治疗作用。本实验用免疫组化法检测导痰汤对大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1表达的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　雄性SD大鼠,体重180～200 g,北京维通利华实验动物技术公司提供,合格证号：SCXK(京)2002-0003。 　　1.2 含药血清制备 　　健康雄性SD大鼠5只,使用导痰汤灌胃,给药剂量为0.9 g/(kg·d),每日2次,每次3 mL,连续10 d。于末次给药后1 h麻醉,无菌条件下经腹主动脉采血,分离血清,56 ℃灭活30 min,分装冻存备用。另取雄性SD大鼠5只,以等体积生理盐水灌胃,所取血清作为对照使用。 　　1.3 脑血管内皮细胞培养 　　取100 g雄性SD大鼠10只,1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,断头处死,无菌条件下分离鼠脑,75%酒精浸泡,置于10%小牛血清的D-hank’s液内。收集大脑皮质,匀浆,80 μm尼龙网过滤,离心。用0.2%胶原酶和0.1%胰蛋白酶37 ℃消化20 min,过滤,分离的细胞悬于含20%小牛血清RPMI-1640培养基。将细胞接种于预先用0.2%明胶包被的聚苯乙烯培养皿中, 37 ℃培养6 h,更换含10 mg/L内皮细胞生长因子的RPMI-1640完全培养基培养。每3 d换液1次,直至长成细胞单层,用0.25%胰蛋白酶消化备用。台盼蓝染色并记数后,将细胞按照105/mL的密度接种于BIO-RAD 8孔培养板内,37 ℃、5% CO2培养箱内孵育。通过第Ⅷ因子相关抗原(FⅧ-RA)免疫组化阳性检验,证实为血管内皮细胞。 　　1.4 分组 　 将培养的内皮细胞随机分为3个组。对照组；TNF-α组：TNF-α的浓度为100 U/mL(作用时间2、4、6、12、24 h)；导痰汤＋TNF-α组：含药血