江苏省徐州市王杰中学高三生物总复习导学案：《生物化学与分子生物学技术实践》（苏教版）.docVIP

【学习要求】 蛋白质的提取和分离（A） 【知识梳理】 ．凝胶色谱法也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由 构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同。相对分子质量较小的蛋白质 进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速率 。 ．缓冲溶液作用是 。 ．电泳是指 。 电泳利用了待分离样品中各分子 以及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。两种常用的电泳方法是 和 。在测定蛋白质分子量时通常使用 。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于 以及 等因素。 ．蛋白质的提取和分离一般分为四步： 、 、 和 。 ．样品处理 (1)红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是 ，采集的血样要及时采用 分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的 ，将下层暗红色的 倒入烧杯，再加入 ，缓慢搅拌 ，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至 ，表明红细胞已洗涤干净。 (2)血红蛋白的释放：在 和 作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第1层为无色透明的 ，第2层为白色薄层固体，是 ，第3层是红色透明液体，这是 ，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 (4)透析：取1 mL的血红蛋白溶液装入 中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量的浓度为20 mmol／L的 中，透析12 h。透析可以去除样品中 的杂质，或用于更换样品的 。 ．凝胶色谱操作首先要制作 ；第二步是 ，因为 ，所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。在装填凝胶柱时，不 得 有 存在，避免降低分离效果；第三步是 。 【课时练习】 ．相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 ( ) 2．蛋白质提取和分离分为哪几步 ( ) A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 ．将经处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r／min的速度离心10 min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是 ( ) A．血红蛋白、甲苯层、脂类物质层、沉淀层 B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂类物质层 C．脂类物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层 D．甲苯层、脂类物质层、血红蛋白、沉淀层 ．下列操作正确的是 ( ) A．分离红细胞时采用低速长时间离心 B．分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 C．红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可． D．透析时要用20 mmol／L的磷酸缓冲液，透析12