基于外周血液中基因差异表达分析的奶牛早期妊娠诊断.pdfVIP

中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛／肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会论文集 173 基于外周血液中基因差异表达分析的奶牛早期妊娠诊断 程蕾’，刘晓华，钱运国，童伟文，王定发，王肆玖，凌明湖，夏瑜 (湖北省武汉市畜牧兽医科学研究所，湖北武汉430065) 摘要：奶牛的早期妊娠诊断在实际生产过程中具有重要的意义，但是现有的妊娠诊断技术因存在诸多弊 端很少能够在生产中应用和推广。妊娠识别阶段某些关键基因在外周血液中显著差异表达规律为我们探索 新的早期妊娠诊断技术提供了契机。本文对奶牛妊娠诊断的研究进展进行了简要阐述，提出了通过分析外 周血液中关键基因的表达情况对奶牛进行早期妊娠诊断的方法，并着重就其基本原理、应用前景以及存在 的问题进行了阐述。 关键词：奶牛；妊娠诊断；外周血液；基因表达 奶牛发情配种后若不能及时准确地判断是否妊娠会直接造成产犊间隔延长、繁殖率降低、产奶量减少， 进而导致饲养管理成本增加，严重影响经济效益。因此，奶牛的早期妊娠诊断一直是广大畜牧工作者与养 殖户共同关注的问题。目前已经存在一些有关早期妊娠诊断方面的技术，但是它们要么是需要借助一些高 昂的仪器设备或检测的条件较高，要么是需要结合直肠检查技术来辅助检验结果的可靠性，导致难以在生 产实践中应用和推广。因此，探索科学、准确、简便、快捷的奶牛早期妊娠诊断新技术，势必会对现有的 管理方法进行技术升级，进一步促进养牛业的发展，具有重要的实践价值和广阔的应用前景。 1奶牛早期妊娠诊断研究进展 奶牛妊娠诊断最初是依据配种后是否返情来判断的，但这种方法很大程度上依赖经验观察，准确率不 高，有的虽然不返情，但仍然是空怀牛，从而导致误判。随着科技的发展，出现了诸如直肠检查法、超声 波法、孕酮测定诊断法、妊娠相关蛋白测定法、乳胶凝集实验法等许多新的方法。直肠检查法可以在奶牛 成功受配后40二50天检测到胚胎【1．2】，但此法既耗费大量人力，又可能会因触及子宫和胎膜对早期胚胎造成 伤害，进而导致母牛直肠组织破坏甚至流产，难以广泛应用。超声波检查方法可以在妊娠第27天左右得出 判断，但是需要一个相当熟练的专职技术人员进行操作，而且B超仪价格昂贵、维护费用高，体积较大， 在我国目前实际条件下很难得到大面积推广。孕酮测定诊断法是在奶牛配种后21-24天采集奶样，通过测定 其中的孕酮含量判断该牛是否受孕【3】。目前测定孕酮含量的主要方法有放射免疫测定法和酶免疫测定法， 但是放射免疫法由于其标记物具有放射性，设备条件和技术要求相当高，而且费时，限制了该技术的普及； 酶免疫测定法因其存在着难以克服的假阳性问题，所以只能作为一种初筛方式进行辅助诊断。另外，通过 测定血液中的妊娠特异蛋白也可以进行妊娠诊断，但是此法只能在奶牛成功受配后30天检测才能判断是否 妊娠【4】。由于上述方法各有利弊，导致目前国内生产上较常见的只有直肠检查法和超声波检查法。因此， 需要探索新的诊断方法来满足现实生产的需求。 作者简介：程蕾(1983．)，硕士，主要从事家畜的遗传育种与繁殖研究 174 中国奶业协会第24次繁殖学术年会暨国家奶牛／肉牛产业技术体系第一届全国牛病防治学术研讨会论文集 2基于外周血液中基因表达分析的早期妊娠诊断 2．1理论依据 妊娠的母体识别发生在奶牛成功受配后的14．18dis61，从时间上来讲上述妊娠诊断方法相对于这一阶段 都比较晚。母体识别是指卵子一旦受精，胚胎即可于妊娠早期产生一系列因子成分，作为妊娠信号传达给 母体，母体随即做出相应的生理反应，以识别和确认胚胎的存在，为胚胎和母体之间的生理和组织联系做 滋养层细胞产生，以旁分泌的形式作用于子宫内膜上皮组织，其作用主要是限制前列腺素的释放，维持黄 体功能，阻止黄体退化。反刍动物孕体在早期妊娠时可产生大量的IFNT，进而诱导子宫内膜干扰素刺激基 因(IFN．stimulated genes，／SGs)上调表达，通过调控子宫内膜基因的表达来建立和维持妊娠。越来越多 的研究表明在外周血单核细胞中也存在这种诱导表达，在胚胎附植和早期妊娠过程中IFNT激活外周血单核 细胞，使子宫内膜细胞更容易接受胚胎，从而为下一步发育奠定基础【sj。因此我们可以通过检测妊娠早期 实，在妊娠早期的母体识别阶段绵羊外周血液中粘病毒抵抗基因(^Ⅸ)显著上调表达【91。与之类似，未妊 resistancel，