反相高效液相色谱法测定瘤胃液中的生物胺.pdfVIP

动物营养学报2011，23(12)：2165-2169 ChineseJournal Nutrition ofAnimal doi：10．3969／j．issn．1006_267x．2011．12．018 反相高效液相色谱法测定瘤胃液中的生物胺 王东升霍文婕朱伟云毛胜勇+ (南京农业大学动物科技学院，南京210095) 摘 要：本文旨在应用反相高效液相色谱法建立瘤胃液中生物胺的测定方法。样品经 0．5mol／L盐酸提取后，用丹磺酰氯柱前衍生，流动相为乙腈和0．1moVL乙酸铵溶液；采用梯 度洗脱，流速为1．0mL／min；紫外检测器波长254nln，柱温30℃。应用该方法，研究高精料和 低精料饲粮条件下瘤胃液中5种生物胺浓度的差异。结果表明：采用该方法，色胺、腐胺、甲胺、 组胺和酪胺5种生物胺能在40min内得到良好地分离，回收率为88．46％～98．49％，相对标准 偏差小于10％。在高精料饲粮条件下，饲喂前山羊瘤胃液中的酪胺和甲胺浓度显著高于低精料 饲粮(P0．05)，但组胺、色胺和腐胺浓度无显著性差异(P0．05)。结果提示，该方法可用于 瘤胃液中的生物胺的分析，饲喂前山羊瘤胃液中的酪胺和甲胺浓度受饲粮精粗比的影响。 关键词：反相高效液相色谱法；生物胺；瘤胃液 中图分类号：$826；$852．6文献标识码：A 文章编号：1006-267X(201])12-2165-05 生物胺(biogenicamine，BA)是脂肪族、芳香对宿主健康带来危害‘引。由此，为进一步了解瘤 族或杂环族的低分子质量有机碱，常存在于动植 胃内生物胺的生成规律，本试验采用反相高效液 体内及食品中…。反刍动物瘤胃液中的生物胺主 相色谱法，建立瘤胃液生物胺的测定方法，拟为深 要是由瘤胃液中相关微生物产生的酶或饲料原料 入探讨瘤胃内氨基酸的代谢及生物胺的生成规律 中固有的酶催化瘤胃液中游离氨基酸脱羧基生 奠定基础。 成心J。正常状态下，瘤胃液中生物胺浓度很低，但 当动物摄入的蛋白质或可发酵碳水化合物大量增 1材料与方法 加时，瘤胃液中的生物胺浓度会增加，进而致宿主 1．1试剂和样品 出现一系列疾病，如蹄叶炎等旧j。因此，建立瘤胃 液中生物胺的检测方法，对于了解瘤胃内生物胺 的生成规律具有重要意义。 尽管目前已有多种方法应用于食品生物胺的 测定，如：薄层色谱(TLC)、毛细管电泳(cE)、气相 为色谱纯；盐酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、冰乙酸为分 色谱(GC)以及基于生物传感器的方法等¨4J，但 有关瘤胃液中生物胺的检测方法的报道很少，并 备。瘤胃液采自饲喂精粗比为1：9和7：3的6头 且多为仅针对于某一类生物胺，如组胺或色胺等。 长江三角洲白山羊(雄性)，饲粮精饲料由70％玉 实际上，瘤胃液中还可能存在腐胺、尸胺 米和30％豆粕组成，粗饲料由70％苜蓿和30％羊 等源于氨基酸的异常代谢产物，而这些物质也会 草组成。 收稿日期：2011—06—16 基金项目：国家重点基础研究发展计划(2011CBl00801) 作者简介：王东升(1987一)，男，山东潍坊人，硕士研究生，从事奶牛营养研究。E—lnail．-wangdongshengdk2@163．com }通讯作者：毛胜勇。副教授。硕士生导师。E—mail：maoshengyong@163．tom 万方数据 动物营养学报 23卷 1．2试验方法 1．2．6加标回收率试验 1．2．1标准储备液及标准溶液的配制 取新鲜样品，按照1．2．2方法处理样品，取 准确称取色胺16．0mg、腐胺16．1mg、组胺 200斗L样品加入5种生物胺标准溶液，使之相当