环境内分泌干扰物诱发小鼠睾丸细胞DNA损伤地研究.pdfVIP

环境内分泌干扰物诱发小鼠睾丸细胞DNA损伤的研究 刘征涛 (中国环境科学研究院，北京，100012) 大量动物流行病学资料表明，许多环境化学物能模拟或干扰动物体内的内分泌机 能，尤其是处于发育阶段的哺乳类、爬行类、鸟类和鱼类动物。实验证据表明。环境 内分泌干扰物对动物雌激素、甲状腺素、儿茶酚胺、睾酮等呈现显著的干扰效应．烷 基酚类化台物属环境内分泌干扰物，被广泛地用作塑料增塑剂、工业用洗涤剂、农药 乳化剂、纺织行业的整理剂等。不但污染广泛，而且已经发现该类化合物亦是促乳房 癌细胞活性化与增殖现象的环境内分泌干扰物。单细胞凝胶电泳技术(SCGE)在检测 化学物质引起的DNA损伤方面具有简便、快速、敏感性高等优点．近年来被广泛用于 DNA损伤、生物监测、遗传毒理、肿瘤治疗评价等领域的研究。哺乳动物细胞体外测 试系统在诱变剂遗传毒性评价中是不可缺少的重要部分，为了探讨烷基酚类化合物的 诱变活性，本文采用原代小鼠睾丸细胞对烷基酚类化台物所致的DNA的损伤进行了研 究。 1．1小鼠精原细胞的分离与染毒 小鼠睾丸细胞的制各颈椎脱臼处死小鼠，取两侧睾丸，放于(35ram)玻璃平皿， 用预温过的Hanks工作液冲洗两次，小心除去被膜与血管，转移至小烧杯。加少许的 Hanks液，用眼科剪剪碎曲细精管．以一定量的Hanks液稀释后，通过100目筛网， 收集细胞悬液，离心(1000转，分，lO分)，Hanks重悬，调细胞浓度。以苔盼蓝染色 1．t Modified I)．加DMEM(Dulbeeco‘s 观察细胞存活率。将制得的细胞分装于epp管(50 I．t 1．受试物lO”l(同时以丙酮和丝裂霉素作阴性和阳性对 EagleMedium)培养基600 u1)Hanks液重悬。冰水浴备用。 1．2单细胞电泳 铺胶前用苔盼蓝染色测定细胞存活率。铺好胶层的玻片在碱性电泳液中静置25rain 乙锭染色。 1．3结果与分析 在荧光显微镜下细胞DNA呈桔黄色，正常的呈圆团形，损伤的细胞DNA产生单 链断裂．断片向阳极迁移，形成慧星样的拖尾现象，呈梭形或放射状。根据细胞慧星 荧光尾部与其可见头部的比例．将损伤程度分为0级(无损伤)、l级(轻度损伤)、2 级(中度损伤)、3级(重度损伤)及4级(极其严重损伤)。每张玻片观察100个细胞， units)。 统计每组细胞的拖尾率．进行t2检验，并计算细胞损伤率及专用单位(Arbitrary 烷基酚类化合物对小鼠睾丸细胞DNA的损伤的测定结果见图l、2。从中可看出，DMSo 阴性对照组仅有5％的细胞出现DNA迁移，且迁移距离很小，损伤程度为5(专用单 位)：而MMC的阳性对照组表现出99．5％的细胞拖尾率。并且细胞严重损伤，其损伤 12l 程度为248．00(专用单位)，这证明了本实验系统的可靠性。本实验按毒性试验结果， 将9种化合物分为两类不同剂量组型(A组型及B组型)，从表中可看出．9种烷基酚类 化合物均能引起不同程度的DNA损伤，并呈现荆量效应关系(见图l、图2)。其高剂 量组与对照组相比，均有极显著性差异(P0．01)。各浓度在染毒1．5h后，所有细胞存 活率均大于90％．说明DNA损伤系受试物遗传毒性所致，而非细胞毒性。在A组型 (1，5，20 mg／L)中，拖尾率最高的是色醇，依次是4．乙基酚、邻甲酚、苯酚：在B 组型(O．25、0．5、l mg几)中，拖尾率最高的是五氯酚，依次是4．辛基酚、4．壬基酚、 2，3，4一三氯酚、2，4一二氯酚。 烷基酚类化合物对小鼠睾丸细胞DNA损伤的SCGE 研究工作，至今尚未见报道，我们将SCGE技术用于本实验，其结果显示出烷基酚类 化合物对DNA有明显的损伤作用。从表中亦可看出，DNA的损伤程度与化学结构有 一定的关系。苯酚环中增加