%5bOs(bpy)2Cl2%5d%2b作为电化学指示剂的HBV+DNA传感器探究.pdfVIP

DNA传感器研究 [Os(bpy)2C12l+[乍为电化学指示剂的HBV 朱永林鞠规先‘ (南京大学化学系，210093) 摘要：以已知浓度的乙型肝炎病毒(HBv)DNA为模板进行PCR扩增，用共 价键合的方法将PCR扩增所得的HBV DNA片段修饰到金电极表面上，并进行杂 极上的单链(ss)、双链(ds)小牛胸腺、乙肝病毒DNA的相互作用．与裸金电极以 及共价修饰的单链DNA电极相比，【os(bwhCh]+在杂交后得到的双链DNA电极 上的峰电流显著增大。通过错配对照实验显示乙肝病毒DNA在金电极表面的杂 DNA传感器的电化学指示剂，结合 交具有特异性，【Os(bpyhCl2】呵以用作HBV ‘ PCR技术，能检测15mol的HBVDNA片断。 关键词：电化学DNA传感器，z．肝病毒．PCR，【Os(bpyhCIz】+，杂交 在众多的金属配合物中，金属锇的配合物(os，L)与DNA的作用尤为关注1101。在二十世纪 嘧啶碱基共价键合．这种键合可以用滴汞电极在大约一1．2v(相对于SCE)处用催化信号进行 检测。虽然有关锇配合物与DNA作用已得到广泛研究，但用它们作为HBVDNA传感器的电 化学指示剂还未见报道。本文用一种锇配合物[Os(bpy)2Cb]+作为电化学指示剂．研究了该配合 物分别与杂交前后金电极上的单链(站)、双链(出)乙肝病毒DNA的作用。制成电化学I-iBV DNA传感器，并探讨了该配合物与单、双链DNA的作用机理． 1实验部分 1．1仪器与试剂 CATCCTGGGCTTTC-3’和5’-AAAAAG 均购自上海科华公司．寡核苷酸引物为5’-CAT MTds+O．1M TE溶液为O．1 EDTA溶液配制。所有其他试剂均为分析纯试剂。所有溶液均用 二次水配制。仪器为BAS．100B电化学分析仪、Perkin-Elmer9600PCR扩增仪。 1．2PCR扩增 扩增溶液包括10山10XPCR缓冲液，6Ill25mlvlMgCh，6山4×5mMdNTP$，各3叫引 DNA模板。用双蒸消毒水定容至100lIl。扩增前在100‘C水浴5分钟预变性。 物．以及10$tl 加入25单位1如酶后，94‘c预变性90s，然后94’c25s和60‘c60s双温循环40圈，70．c 延伸10分钟后于4‘C保存至使用前。 1．2共价固定法制备电化学HBVDNA传感器 金电极(0．3mm)抛光至镜面，清洗后在0．1mM巯基丙酸溶液中浸泡6小时后。再扩增后 ml‘EDC 得到的HBVssDNA+O．04 8．o)溶液过夜。制成CTssDNA或者HBV mg TE(pH ssDNA或HBV ssDNA修饰金电极。将CT ssDNA修饰金电极浸入含配对CTssDNA或HBV M ssDNA的杂交缓冲溶液(O．3 dsDNA修饰金电极。取出淋洗待用。 ”l 2结果与讨论 2．1[Os(bpyhCl21+作电化学HBVDNA传感器探针 【Os(bpyhCl2]+分别在裸金电极(a)、HBV ssDNA／Au(b)和杂交后得到的HBVdsDNA／Au(c) 上的循环伏安图。用CTssDNA进行杂交错配实验 的结果见图l，与HBVssDNA／Au电极相比， [os(bpyhCl21+在错配后电极上的峰电流和峰电位 几乎没有变化，表明CTssDNA不能与电极上的 HBV ssDNMAu杂交。因此，1目[Os{bpyhCl2]+作为