Dot—ELISA检测饲料中沙门氏菌地研究.pdfVIP

人畜‘共患传染病防治研究新成果汇编 Dot—ELI sA检测饲料中沙门氏菌的研究 韩志辉。魏建华2 00 3) (1，青海大学农牧学院动物医学系，西宁810003；2．青海省畜牧兽医科技咨询站，西宁B1 的检测，同时采用常规分离培养鉴定技术作为对照试验。结果在i00份成品饲料，85份鱼粉和50份精蛋 为83．72％，78．13％和84．85％。经统计分析，两种方法在三种样品中的差异均不显著(P0．05)。 关键词：Dot--ELISA：检测：饲料：沙门氏菌 沙门氏菌是人和动物的重要致病茵，人类沙门氏菌病的感染近年来有普遍上升的趋势，人的沙门氏菌 感染和带菌与所食用的盲禽肉、蛋及其制品中的沙门氏菌的污染有直接的关系，且致病因素复杂多 ”。“8”“1。此外。沙门氏菌作为人类食物中毒的主要致病菌之一，在医学、兽医和公共卫生学上均有十 分重要的意义。目前．对于沙门氏菌的检测方法种类较多，而细菌分离培养鉴定技术在检测样品过多时， 费时，费工，且特异性和敏感性较低，其他检测方法则需要较精密的仪器设备和较繁琐的步骤，不适应于 基层推广。因此，建立动物性饲料中沙门氏菌的快速、特异、敏感而又便于现地推广使用的检测方法就显 料、鱼粉和精蛋白三种样品进行了沙门氏菌的检测，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1备检材料随机在西宁市某饲料厂采取成品饲料100份，鱼粉85份，精蛋白50份。 1．I．2沙门氏菌属诊断清卫生部兰州生物制品研究所生产，批号：810003。 1．1．3 封闭液，底物溶液，洗涤液，HRP标记的羊抗兔IgG均由动物传染病实验室提供。 I．1．4 分离培养鉴定主要材料s．S琼循(北京市海淀区微生物培养基制品厂，批号：890925)。缓冲 蛋白胨水增菌液(BP)，胆盐乳糖(BL)增菌培养液，普通琼脂斜面，葡萄糖培养基，乳糖培养基，麦芽 糖培养基，甘露醇培养基，蔗糖培养基，蛋白胨水，葡萄糖蛋白胨水，硝酸钾蛋白胨水，西蒙氏枸橼酸盐 培养基，醋酸铅培养基，尿素琼脂培养基，三糖铁培养基均由本室自制。 1．2 方法 1。2．1特异性测定用鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、变形杆菌作Dot--ELISA试验，进行特异性测定。 ×101，12×105，12×108个沙门氏菌作敏感性试验。 水增茵液(BP)中，37℃培养4h。 ——一 垒里苎星堡墨塑堕塑塑塞堑壁墨篓塑 24h。 1．2．5分离培养取上述增菌培养液划线接种到S．s平板上，37℃培养24h。 1．2．6Dot--ELISA检测 1．2．6．1取适当大小的硝酸纤维素膜，将其浸入蒸馏水中浸湿，取出，待自然干燥后于其光面用打孔器 打孔(直径约0．4-0．6cm)。 I．2．6．2将增菌培养液隔水煮沸15rain，取出降至室温，摇匀，点样，自然干燥。 1．2．6．3将膜置于I％H：0z溶液中lOmin，取出在三缸洗涤液中依次漂洗，每缸5min。 每缸5min。 洗，每缸5min。 依次漂洗，每缸5min。 果。避光保存。 1．2．6．8判定结果时，观察膜上的颜色，凡呈现棕黄色斑点者为阳性“+”，不呈现棕黄色斑点者为阴性 “一口 1．2．7生化试验挑选可疑菌落，进行涂片，染色，镜检，并经过纯化培养后，进行生化鉴定。 1．2．8血清学鉴定依据沙门氏菌属诊断血清操作说明书进行 2 结果 (1)特异性测定结果：鼠伤寒沙门氏菌为阳性，大肠杆菌、变形杆菌、D～魏氏梭菌均为阴性。 (2)敏感性测定结果：其结果为400个／ml。 见表1、2、3。 表l Dot--ELISA法与常规分离培养法检测沙门氏菌的结果 人畜共患传染病防治研究新成果汇编 表2血清学鉴定结果 (3138)；伦敦沙门氏菌和阿伯丁沙门氏菌各1株，各占2．63％(1／38)：利密特沙门氏菌4株，占 沙门氏菌2株，占6．67％(2／30)。 表3生化试验鉴定结果表 ———————————————————叁堕苤皇壁鲞塑