果糖修饰多孔壳聚糖支架上肝细胞生长状况地研究.pdfVIP

了血浆蛋白、凝血因子、补体、调理素等生理活性物质，有效地改善了机体的内环境，阻断肝脏损害的恶 性循环，为肝细胞的再生创造条件，促进肝功能恢复。血浆置换技术是目前较为成熟的肝脏替代疗法，能 够明显降低重型肝炎的死亡率。[2]我们通过对本组资料的观察发现，经血浆置换治疗后患者的症状、体 征明显减轻，肝功能生化指标好转，病情控制早，病程缩短，总体治愈好转率达63％，明显优于对照组(45％)。 而早、中期患者的治愈好转率明显高于晚期患者。晚期患者由于大块的肝坏死及各种严重并发症，25％的 治愈好转率与单纯药物治疗20—30％的存活率无明显差异[3]，因此PE主要适用于早、中期重型肝炎的治疗 [4]。另外，在PE治疗中不良反应主要为输入大量异体血浆所致的过敏反应，而经常规的抗过敏处理后均 能缓解，未出现过敏性休克等严重反应，显示人工肝血浆置换治疗有较好的安全性。因此，我们认为血浆 置换不失为一种治疗重型肝炎有效、安全手段，但必须强调在疾病早期治疗的重要性。 参考文献 1．病毒性肝炎防治方案。中华肝脏病杂志2000，8(6)：324—329 2．李兰娟，黄建荣， 陈江华等。人工肝支持系统治疗重型病毒性肝炎的研究。中华肝脏新病杂志1997， 5(4)：202-204。 3．彭文伟主编， 传染病学。北京人民卫生出版社1999：27 26(1)：927—928 4．许家璋。重型肝炎诊断分型和治疗研究的进展。江苏医药杂志2000， 果糖修饰多孔壳聚糖支架上肝细胞生长状况的研究 南开大学生物活性材料教育部重点实验室300071 潘继伦李结良张立国俞耀庭 生物人工肝支持系统(BAL)是近年来发展起来对肝功能衰竭进行治疗的一种很有前景的方法。提高 脱乙酰化产物，也是众多天然多糖中唯一的碱性多糖，具有良好的细胞相容性[2—4]。肝细胞在体内生长 在细胞外基质(ECMs)构成的三维环境中，在体外，这种贴壁依赖细胞则需要附着在支架材料上生长和代 细胞黏附[6，7]。 我们从改善材料的化学组成和几何形态考虑， 模拟体内的三维环境， 利用壳聚糖制备多孔网状结构 支架，并用果糖进行修饰。多孔结构支架可以通过冷冻和冷冻干燥壳聚糖凝胶获得， 修饰多孔壳聚糖支 架用于原代肝细胞培养，可以提高细胞培养密度和代谢活性。 材料和方法 l材料 CHEMICAL 天津市药物研究院提供： 胶原酶D，SIGMA CO；Williams’E培养基，GIBCOBRL；小牛血 清、HEPES购自中国医学科学院血液研究所：其它试剂均为国产分析纯。NuairC02培养箱：Costar细胞 培养板：HitachiX一650扫描电子显微镜。 2壳聚糖多孔支架的制备 将壳聚糖溶于0．5M乙酸中，配成1．矾(w／v)溶液，向六孔细胞培养板每孔加入Iml，40C预冷6h， 置于一280C冷冻过夜，冷冻干燥10 h以上，得到多孔支架。以1．5％NaOH溶液水化，水洗。浸于10％果 糖溶液中300C振荡反应24h。加入适量硼氢化钾，室温避光还原反应过夜。水洗，用PBS溶液调pH至 一336— 74，二次冷冻1：燥。接种细胞沛J玎7095乙醇灭菌处理。 3人鼠肝细胞的分离2粥莽 选取2002509雄性w1 0×106 胞存活率井计数r存活率9啡以l。的细胞用I：材料实骀。肝细胞配成浓度为1 cel】s／m1的细胞怂 液，A孔扳每孔‘}l接种1×106个细胞，补加Im]培养基，j：370C，5％C02条件下静置培养。6小时后舰 察细胞黏附情况·更换新鲜培养基。以后间隔24h蜓换50％培井牡。型换的培养基用t·白蛋自古jiI测定． 同时扯细胞培养过程tI-硅微观察细胞肜态和生长情况。 4代谢活性的测定 n蛋rl的测定采用溴甲酚绿法。在pl[42环境中．澳‘}1酚绿矗．怍离予占垢荆聚氯己烯H桂醚(BrIJ一35 u 存在时，可与“虽n形成蓝绿色复合物。分别取5l牛理{b水、标准自蚩白(49／d])和特测样晶加入 到样品管中，加入含肯溴甲酚绿(终