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第六节 用基因工程方法研制高产重组二十二碳六烯酸 317 第六节 用基因工程方法研制高产重组二十二碳六烯酸 二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)是人及其他动物的重要必需多不饱和脂 肪酸。DHA能促进脑细胞的生长发育，改善大脑机能和行为学习，可用于预防和治疗中枢神 经的疾病u，2j。DHA和EPA具有以下生理功能：①降低血脂、胆固醇和血压，预防心血管疾 病；②能抑制血小板凝集，防止血栓形成与中风，预防老年痴呆症；③视网膜的反射能力．预防 视力退化；④增强记忆力，提高学习效果；⑤抑制促癌物质前列腺素的形成，因而能防癌(特别 是乳腺癌和直肠癌)；⑥预防炎症和哮喘；⑦降低血糖，抗糖尿病；⑧抗过敏¨-6]。因此，市场 对DHA需求量与日俱增，DHA已成为国际研究的热点。目前，市售DHA的营养保健品30 多种，DHA的健康食品及其他形式的DHA营养补充剂主要依赖于进El，我国在该领域的研究 刚起步，DHA的产品有巨大的市场o“ 目前，DHA的来源是从深海鱼油中进行分离。然而，深海鱼油资源十分有限，还面临着 其他问题：①鱼油中的∞一3型DHA和EPA的构成和含量随着鱼的种类、季节、地理位置等 变化而变化；②从鱼油中提取的DHA含胆固醇多，可能含有因环境污染所致的重金属和二恶 J。 英，并带有腥味，影响了产品的品质；③提取过程复杂，成本高，产率低，产品昂贵旧9 为丰富，如破囊壶菌(Thraustochytrium 业性开发的潜在来源uo|。微生物生长速度快、培养简单；不受原料的限制；利用生物技术合成 DHA具有周期短；能够人为控制影响因素，保持DHA产量和含量的稳定；真菌发酵生产DHA 时，较少合成EPA及其他多不饱和脂肪酸，利于DHA的分离浓缩和制备高纯度DHA；微生 物发酵法生产的DHA不具有从鱼油中提纯的DHA的鱼腥味，更有利于DHA的应用【11，12|。 3J和Yanoll4 因此，日本、美国等国纷纷对发酵法生产DHA进行了研究。Delonguo等分别从深 roseum 仍处于实验室阶段。 目前，合成DHA的途径已很清楚，从葡萄糖经丙酮酸生成乙酰辅酶A，乙酰辅酶A一各种 J。 其中，△一6脱饱和酶是关键酶。因此，重要的是选育优良菌种和DHA合成酶系的研究【16 最新研究结果表明，大多数动物脱饱和酶可以催化与甘油脂相连结的脂肪酸脱饱和。但 子¨7|。Thiede等【18 酵母不饱和脂肪酸缺陷突变株OLEl分离得到甄补olel突变的基因组DNA片段。该片段编 码长510个氨基馥豹硬艟酰Q滤脯偬帮黪。藤魏燎瓣一e张麟健辩黪萋瘸掏建鲍嵌合质粒 318 第六章 营养与饲料研制技术 球酵母、虱、鲤鱼和真菌Histoplasma capsulatum等中均克隆了硬脂酰CoA脱饱和酶。 脂酰CoA脱饱和酶受到多种因素的调节。Ntambi[20 3发现喂禁食的普通老鼠之肝硬脂酰 CoA脱饱和酶基因转录和mRNA水平分别上升了ll和45倍。果糖、胰岛素和维生素A均正 SCDl基因的转录从而提高SCDl mRNA的水平，但其诱导可被环已酰亚胺所抑制。在低温 下脂酰CoA脱饱和酶活力上升，可能低温不但正调节了基因转录，而且活化了现存的酶。 但是，对脂肪酸脱饱和酶的催化机理和调节机制不甚了解。还有许多种膜结合脱饱和酶 未被分离或其基因未被克隆，在动物和微生物领域更是如此。这些因素都限制了脂肪酸脱饱 和遗传操作的进一步应用。 基因工程育种具有常规育种无法比拟的优势。通过对不饱和脂肪酸生物合成途径关键酶 在分子水平上的调节，有可能大幅度提高菌种不饱和脂肪酸的合成能力。作为改造生产菌株 的第一步，必须首先克隆被孢霉不饱和脂肪酸生物合成途径的相关酶基因，并在分子水平上理 J。 解它们的作用