巴豆提取物对小菜蛾幼虫拒食活性的研究 - 中国植物保护学会.docVIP

巴豆提取物对小菜蛾幼虫拒食活性的研究 徐翔1,2 王海建2 钟策宏2 蒋春先2 李庆2※ 杨群芳2 （1. 四川省农业厅植保站，四川成都 610041；2. 四川农业大学农学院，四川成都 611130） 摘 要：： 巴豆(Croton tiglium)大戟科巴豆属的一种常绿灌木或小乔木，一种有毒中药，入药的功效是至泄(内服)和蚀疮排脓(外用)。巴豆对蚜虫对非洲粘虫(Spodoptera exempta)有很好的拒食活性，对棉红铃虫(Pectinophova gossypiella)有强烈的生长抑制作用，对赤拟谷盗(Tribolium castaneum)成虫产卵及生长发育有显著的影响。有较强的拒食和生长抑制作用，对小菜蛾成虫有较强的产卵忌避作用巴豆作为植物源拒食剂具有一定的潜在价值利用活性跟踪分离技术，采用萃取法、柱层析法和薄层层析法对巴豆乙醇提取物对小菜蛾的拒食活性成分进行了分离 1.材料与方法 1.1试验材料 巴豆(Croton tiglium)果实，由重庆市南川中草药种植研究所提供。小菜蛾(Plutella xylostella L.)，采于四川农业大学周边农村菜地中，于养虫室内用萝卜苗饲养幼虫，用10%蜂蜜水饲喂成虫。饲养条件：温度25±1℃，相对湿度75%±5%，光照时间12h/d。 参照蒋春先等方法[]，将巴豆果实用清水洗净晾干后，置于50℃恒温干燥箱中烘干，再用粉碎机充分粉碎制成干粉。称取巴豆干粉，装入广口瓶中，加入5倍量（V/W）的工业酒精，置于超声波细胞粉碎机粉碎振荡1h。工作参数为工作时间7 s, 间隙3 s, 温度保护50℃。过滤提取液, 减压浓缩得到巴豆乙醇提取物。 采用萃取法对巴豆乙醇提取物进行初步分离。称取巴豆果实乙醇提取物稠膏，加10倍量（V/W）的蒸馏水，装入分液漏斗中，依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯各萃取4次，最后分别将这些萃取液和水相液减压浓缩至稠膏，并计算出萃取率。经过生物活性测定，对活性高的萃取物进行柱层析分离。柱层析采用湿法装柱，洗脱剂采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇系统，梯度洗脱，洗脱速度为2滴/s，每100ml收集1份，用薄层层析检测并合并相同流分。经过生物活性测定，对活性高的流分进行薄层层析分离，薄层层析展开剂为石油醚：乙酸乙酯：乙醇=10：3：1(V/V/V)。 参考张国洲的叶碟法[]，先用打孔器将新鲜甘蓝叶片打成直径为3cm的叶碟。再放入10mg/ml供试样品的乙醇溶液中1s即取出(对照叶碟仅以乙醇作相同处理)。待叶碟晾干后，将其放入培养皿中(内垫滤纸，加少量蒸馏水保湿)，每个培养皿中放入2片处理叶碟和2片对照叶碟，交替放置。每皿接入10头饥饿24h的3龄幼虫，每组重复3次。24h后用坐标方格纸测定剩余面积，并据此计算试虫拒食率： 式中：C、T分别表示对照和处理的取食面积。 采用SPSS10.5软件对数据进行方差分析。 采用石油醚、乙醚和乙酸乙酯对巴豆乙醇提取物进行初步分离，各溶剂萃取物的萃取率分别为：石油醚(91.63%)＞乙醚(4.23%)＞水(3.46%)＞乙酸乙酯(0.68%)。由表1可知，石油醚萃取物对小菜蛾3龄幼虫的拒食活性最高为84.99%，显著高于乙醚、乙酸乙酯和水萃取物。乙醚、乙酸乙酯和水萃取物对小菜蛾幼虫的拒食活性之间无显著差异，均在30%以下，拒食活性低。说明巴豆乙醇提取物的拒食活性物质主要存在于石油醚萃取物中。 表1 巴豆几种溶剂萃取物对3龄小菜蛾幼虫的拒食活性 Table1 Antifeedant effect of Croton tiglium extracts on 3rd-instar larvae of Plutella xylostella L. 处理 各重复拒食率(%) 平均拒食率(%) Ⅰ Ⅱ Ⅲ 石油醚萃取物 100.00 70.51 84.47 84.99±8.52a 乙醚萃取物 10.29 34.34 44.08 29.56±10.09b 乙酸乙酯萃取物 20.11 24.28 9.58 17.98±4.16b 水萃取物 8.10 10.24 2.00 6.78±2.41 b 注：多重比较结果如表中字母所示，存在相同字母表示差异不显著(邓肯氏，0.05水平)。 巴豆石油醚萃取物经过硅胶柱层析，分别用石油醚；石油醚：乙酸乙酯(95：5，90：10，85：15，80：20，75：25，70：30，65：35，60：40，55：45，50：50)；乙酸乙酯：甲醇90：10进行梯度洗脱，得45个流分。经过TLC分析，将45个流分合并为9个流分（表2）。 表2 巴豆萃取物柱层析分离流分合并情况 Table2 The coalition of Croton tiglium extracts colu