细胞因子对关节软骨细胞作用地研究.pdfVIP

细胞因子对关节软骨细胞作用的研究 天津医院骨研所(300211)谈志龙邢国胜李德迭王淑云于顺禄 白人骁李士民张凯王毅 I}商要】目的观察白细胞介素113(IL—lB)、肿瘤坏死因子“(’FNF一“)、转化生长因子13， (TGF—Bt)对关节软骨细胞的影响，旨在探词骨性关节炎的发病机理。方法应用软骨细胞体 外培养，分别加入细胞因子，用ELISA方法，测定培养液中的基质金属蛋白酶3(MMP一3)和 3刀高(P【J．05，Po ’INF—d促使MMll—3 有较大的刺激作用，对研究骨性关节炎发病机理有重要参考价值。 f关键词j细胞因了；关节软骨；软骨细胞；体外培养；骨关节炎 骨性关节炎(Osleoarthrilis，OA)是一种进行性病变，表现为进行性关节软骨破坏及关节 边缘赘骨形成，发病机制尚不明确，近年来有报道认为细胞因子在软骨基质破坏上起到关键 性作用，为了解细胞因子对软骨细胞作用与困子间相互关系，本文采用关节软骨细胞体外培 养，加人IL一1B、TNF一Ⅸ、TGF—p-，观察软骨细胞分泌MMI’3，PGE：水平。 材料与方法 Tech Tech ECLtd批号 (Sigma)，IL一113(美国PeproECLtd批号037951)，TNF一Ⅱ(美国Pepro Tech Mel． ECLtd批号03S88)，基质金属蛋白酶试剂盒(Malrix 06025)，TGF—B-(美国Pepro Site批号045844)，前列腺素E2试剂盒 alloproteinase一3，MMP一3)(英国TheBinding E2，PGEz)(上海太阳生物技术公司)，酶标仪(美国MRXll型)，倒置显微镜 (Prostaglandin Auto FlOW)。 (Olympus)，透射电镜(I：1本JEM一10io)，CO：孵育箱(美国IR 2．实验方法 2．I软骨细胞的分离和培养取流产约4个月胎儿75％乙醇浸泡消毒，切取四肢关节 软骨，注意不要误切滑膜组织，用D—Hanks冲洗后，把软骨块放人盛有D—ttanks玻璃培养 皿中，切成1—2ram3大小，加入lO倍质量分数为2．5％胰蛋白酶于37。C水浴消化30min，吸 弃胰酶，再加人10倍质量分数为0．2％Ⅱ型胶原酶于37℃水浴消化4小时，每15rain混匀1 次，待细胞成悬液后终止消化，150目金属网过滤，细胞悬液1200r／rain离心5rain．弃上清 ·“· 时用04％苔芬兰染色细胞成活率为99％以上。细胞悬液接种48孔板l快，接种36孔，每 孔0 度，饱和湿度培养箱内孵育，培养第3天，细胞贴壁后换液，咀后质的分解和合成代谢是通过 分解性细胞因予和合成性细胞因子平衡来维持的，分解性细胞因于如lL—lB、TNF一(3t，它们 来源于巨嗜细胞、纤维母细胞，软骨细胞，破骨细胞等，只有3％的同源性，生物活性r11NF—a 比lL—lp低100倍，两者作用不同的受体，但表现出许多相似的生物学特性，抑制软骨细胞 分裂和蛋白聚糖的合成，刺激生成MMP～3，引起基质降解，促进骨吸收造成OA的发生。生 长因子，如TGF—p·，能促进软骨细胞有丝分裂，能拮抗1L一1B和TNF—q作用，刺激软骨细 inhibitorof 胞合成胶原，蛋白多糖，上调金属蛋白酶组织抑制剂(Tissue TtMPs)，列骨形成或骨I吸收有双重作用。OA是关节软骨细胞外基质合成与降解失衡， 膜相关受体结合导致依赖cAMP蛋白酶合成，其中IL一1B通过诱导兔关节软骨细胞合成 …，MMI’s主要来源软骨细胞、滑膜细胞、中性粒细胞，能破坏基质I、Ⅱ