早熟染色体凝集(PCC)技术测量辐射诱导的间期染色体损伤与作为生物剂量计的研究.pdfVIP

中华医学会全国医用辐射防护与安全研讨会论文汇编 表3：LcsM半定量测定Dr内H202含量变化 注：+表示与正常对照比较P0．05 果显示两者无显著差异。 讨 论 大多数真核细胞中存在NADPH氧化酶，它可催化氧分子发生单电子还原反应而生成o：一{5I， Dr内有NADPH氧化酶的存在；并且由于02‘。的释放被抑制后，Dr的增殖几乎完全停止，证明 02’的存在对于与增殖有关基因的转录是必要的。此外，低于1KGy的T射线可促进Dr释放02 ‘，刺激Dr的增殖，表明在较低剂量照射下，影响Dr活动的多为源于自身释放的生理浓度的O：‘ 。，以促进增殖效应为主；只有在较大荆量(如3KGy)照射时，辐射形成的ROS大大超过自身 释放的量，此时ROS对Dr的作用以损伤为主，因而抑制其增殖。Dr受辐射刺激后02+一释放的 高峰与增殖高峰并不是同时出现的，利用LCSM半定量测定Dr内H20：释放的结果表明，随着 照射剂量的增高，Dr内H：02释放也随之增高，其趋势恰与Dr受照后的增殖率变化相一致。因 此影响Dr增殖的ROS不止02一一种，H202也可能在其中起一定作用。JamiesonDJ等研究表 明，在～些原核细胞中，ROS可直接氧化还原修饰一些对其敏感的转录因子，促进某些基因的 转录”l。本实验结果表明，ROS对于Dr内与增殖有关的某些基因的转录是必需的。此外，由于 受照后Dr内DNA的降解和修复需要某种信号进行协调【Il，因此ROS除了是Dr正常增殖的重 要第二信使之外，很可能还作为修复信号之一参与照后的修复过程。以往对Dr的研究中，仅有 少量关于大剂量照射产生的高浓度ROS对Dr的作用的报道，未见生理浓度ROS对Dr作用的 研究。 本实验结果为Dr的增殖和照后修复的信号传递、协调机制提供了～个新的思路。 早熟染色体凝集(PCC)技术测量辐射诱导的间期染色体损伤 及作为生物剂量计的研究 江波王晓光姜恩海 (中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所，天津300020) 电离辐射诱导的淋巴细胞染色体畸变早己成为辐射损伤可靠和有效的生物剂量计。而常规细 胞遗传学方法，淋巴细胞必须在促分裂剂植物血凝集素(PRA)刺激下，培养2天，在达到分裂 中期时才能分析染色体，这种方法受到各种物理，生物因素的影响，如细胞培养条件，辐射后受 250 中华医学会全国医用辐射防护与安全研讨会论文汇编 损细胞修复或死亡等。PCC可在一定程度上克服常规技术条件的不足，它利用有丝分裂期(M) 细胞和问期(I)细胞相融和合，诱导间期细胞的染色质提前浓缩凝集，呈现分粒状的染色体样 结构…。从而使处于G。、S、G2期的细胞在受到射线或化学诱变剂等损伤后不需达到分裂中期就 可在相应的各期细胞中直接观察染色体畸变，以避免在培养过程中发生的间期细胞死亡及染色体 损伤，修复所导致的畸变率降低，提高染色体畸变的检出率。但是细胞制各费时、技术要求高、 PCC产额低、不稳定等限制了它作为生物剂量计的应用。最近，使用一些促细胞分裂剂刺激外 周血淋巴细胞取代了过去传统PCC中的细胞融合技术，使PCC方法更为简便快捷。在工业、农 业、医学应用中发生的核意外事故能较为精确地快速地估算出受照者的生物剂量。 材料和方法 1．1将制备好的M，CHO细胞与分离出来的人淋巴细胞按1：2—3混合离心，1000 r．p．m．10 o．25 分钟。留下细胞团块，加入50％PEGml，震荡混合1分钟，随即一滴滴加入Hank’S缓_}珥I ml含血清培养液，0．002％秋水酰胺和 液2．5ml，边加边震摇3分钟后离心去上清液，加入0．5 标本制备步骤同常规染色体细胞处理过程。染色体畸变分析为超过正常二倍体的染色单体数记为 断片，环状染色体记为二次断裂。双盲法阅片，一般为两人同时计数。 1