心痛宁胶囊对易损斑块大鼠模型ET1蛋白表达的影响.docVIP

心痛宁胶囊对易损斑块大鼠模型ET-1蛋白表达的影响 张蕴慧 ( 山东中医药大学，高血压国家中医临床研究基地，济南，250014) 【摘要】: 目的 观察心痛宁胶囊对易损斑块大鼠模型ET-1蛋白表达的影响。方法 将48只大鼠随机分为心痛宁高剂量A组，心痛宁中剂量B组，通心络对照C组，空白对照D组，每组为12只。于实验12周时电镜观测易损斑块大鼠模型ET-1蛋白表达。结果用药后心痛宁大剂量组ET-1蛋白表达积分较心痛宁中剂量组、通心络组、空白对照组均有显著性差异，P＜0.05，通心络组较心痛宁中剂量、空白对照组两组比较有显著性差异，P＜0.05，心痛宁中剂量组较空白对照组无显著性差异，P＞0.05。结论 心痛宁胶囊能有效降低ET-1蛋白质表达，改善血管内皮功能，稳定易损斑块。 【关键词】：心痛宁胶囊；心脏；易损斑块；ET-1 血管内皮细胞参与多种与血管有关的生理和病理生理过程，在生理情况下主要通过产生活性物质，来调节血管张力和血管平滑肌功能。内皮素-1（ET-1）是迄今所知作用最强、持续最久的缩血管多肽,动脉粥样硬化病变本身造成冠状动脉狭窄，内皮细胞缺血、缺氧、损伤，引起ET-1的合成、分泌增加，ET-1与其受体相结合，提高细胞内钙离子浓度，从而发挥强大的收缩血管作用，使冠状动脉强烈收缩，导致斑块局部血流动力学不稳定，容易导致斑块破裂，血栓形成。因此本研究探讨心痛宁方对斑块大鼠模型ET-1蛋白表达的影响，从而为临床研究提供更为广阔的思路。 1材料和方法 1.1实验动物 雄性SD大鼠48只，体重180-200g，由山东大学实验动物中心提供。动物合格证号：SCXK(鲁 1.2实验药品 1.2.1心痛宁胶囊，生药含量：每丸1.25g；胶囊总提取物：每丸含0.5g。由山东中医药大学制药厂提供。原处方组成：黄芪30g、黄精15g、当归12g、川芎10 g、肉桂6 g、红花6 g。 1.2.2通心络胶囊，0.26g/粒，石家庄以岭药业有限公司产品,批号：080612。 1.3实验仪器 1.3.1DMM-200C显微镜，由山东中医药大学附属医院病理科提供； 1.3.2METTLER AE20型电子分析天平，海特勒-托利多上海仪器有限公司； 1.3.3二氨基联苯胺（DAB），购自北京博奥森生物技术有限公司； 1.3.4 4%甲醛溶液，由山东中医药大学附属医院制剂学实验室提供； 1.3.5 ET-1免疫组织化学试剂盒，购自北京博奥森生物技术有限公司。 1.4实验方法 1.4.1分组方法 将48只大鼠随机分为心痛宁高剂量A组，心痛宁中剂量B组，通心络对照C组，空白对照D组，每组为12只。 1.4.2造模方法 一次性腹腔注射维生素D3 60万单位/Kg,高脂饲料喂养6个月。高脂饲料配方：胆固醇3%，胆酸钠0.5%，丙基硫氧嘧啶0.2%，白糖5%，猪油10%，基础饲料81.3%。 1.4.3给药方法 A组给予浓度为125mg生药/ml的心痛宁胶囊药液灌胃，25ml/Kg/天，1次/天；B组给予浓度为62.5mg生药/ml的心痛宁胶囊药液灌胃，25ml/Kg/天，1次/天；C组给予浓度为20mg/ml的通心络胶囊药液灌胃，25ml/Kg/天，1次/天； D组给予生理盐水25ml/Kg/天，1次/天。 1.4.4取材及检测 大鼠ET-1蛋白表达检测 采用免疫组织化学法，具体步骤为：石蜡包埋后的组织标本连续切成4μm厚的切片，经脱蜡，梯度酒精水化后，抗原高压热修复。以3％双氧水孵育10 min灭活内源性过氧化物酶，5%正常的羊血清室温孵育15分钟，倾去，勿洗。滴加适当比例稀释的一抗，4℃冰箱过夜，PBS冲洗，每次3分钟，共3次。滴加二抗，室温孵育15分钟，PBS冲洗，每次3分钟，共3次。滴加三抗，室温孵育15分钟，PBS冲洗，每次3分钟，共3次。DAB染色，苏木素复染，常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。结果判断：参照AXIOTIS等标准，由两位病理医生采用盲法(独立检测)在高倍镜(×400)下读片。每张切片随机观察10个不重复的视野(不足1O个视野的，按实际观察到的视野计数)，根据阳性细胞占同类细胞总数的百分率及细胞染色强度综合判定。染色强度评分标准：不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分。阳性细胞所占整张片比例评分标准：阳性细胞数≤10%为0分，10%～4O%为1分，41%～70%为2分，＞70%为3分。两种评分相加，0～1分为(-)，2分为弱阳性(+)，3～4分为阳性(++)，5～6分为强阳性(+++)。≤2分的定为阴性，＞2分的定为阳性。 取心脏标本 用2%戊巴比妥钠0.2ml/100g体重腹腔注射、麻醉，立即开胸，快速分离、摘取心脏、主动脉，置于4%甲醛溶液中，备做免疫组化。 1.5统计学分析