海风藤提取物对老龄大鼠缺血性脑损伤保护作用的研究.pdfVIP

海风藤提取物对老龄大鼠缺血性脑损伤保护作用研究 同济医科大学附属目湃医院神经科武汉430030 方思羽张苏明郭瑞友插渊撩广润 人们～直关注实验室研究结果与临床实际应用之间的关系。对实验动物有脑保护作 用的药物，用r临床不一定有效．这与年龄不相匹配可能有关。卒中多发生在老年人．太 多佧有年龄相关的脑代谢及病理改变，可影响卒中的预后及治疗效果11,21。本文利用老龄 大鼠局灶性缺血模型探讨海风藤提取物可能的脑保护作用。 材14与方法 一 一、海风藤浸膏制鲁 将干燥藤茎(购于漳州市第二医药公司)加工成租耪重30kg．加95％乙醇浸泡72 小时(粗粉、乙醇之比为l：10)过滤。药渣再加乙醇浸泡(1：6)24小时，过滤．重复 上述步骤3次．将4次所得的过滤液合并．放进减压浓缩罐中(江苏常德制药机械厂)减 压浓缩成棕色膏状物，带有明显的胡椒属芳香味。总回收率为26：1即海风藤269回收浸 膏lg。最后将浸膏与二甲基亚砜(DMSO)混台，溶解．制成浓度为10％的海风藤注射 液(10mlDMSO中含109浸膏)。备用。 二、模型制作 机分为A、B、c、D4组，其中A组在光照前后腹腔注射海风藤注射液各1次，每次剂量 的方法。稍加改进．制成光化学诱导的永久性局灶性脑皮质缺血模型，即实验鼠经0．4％ 度巴比妥钠32mg／kg体重腹腔内麻醉后．消毒并纵向切开头皮．暴霸右侧颅骨，小心分 离骨膜，表面覆以中间带圆孔的进光纸．孔径4ram．圆心位于前囟后约1．gmm，中线旁 右侧2．5ram处。切开股部皮肤，暴孵股静脉．用一次性皮试针管从股静脉缓慢注入2％玫 瑰红B(30rag／1009体重)后，将大鼠固定于立体定位仪上，冷光源探头贴近颅骨表面- 照射强艘为300～320klx．照射时阃30分钟。D纽为对照组，只不予光照，其他处理过 程同C组。 三，一般状态观察 所有大鼠观察其生命体征、精神状态、行为等肢体运动情况。 四、血脑屏障完整性及梗死面积观察 每组取6只大鼠，于光照缺血或单纯注射荧光染料后24小时迅速断头取脑，观察皮 质梗死灶及玫瑰红外渗情况，评价血脑屏障破坏程度．随后立即置于37{2，2％的氯化四 唑氨(TIC)生理盐水中，避光孵育15分钟，溯量梗死灶直径． 五、组织学蹰察 每组另外6只大鼠于同～缺血时闯点，4％多聚甲醛灌注固定，断头、取脑、后固定、 脱水透明、石蜡包埋、切片、HE染色、光镜观察． 1．t m原脑冠状石蜡切片， 六、原位束端脱氯植蔷酸转移酶(TdT)标记(TUNEL)：4 (德国B．M公司)的反应液．37C孵育2小时，连接生物索化抗地高辛抗体-DAB显色一 -5l一 M÷：裘奠染。蛮唑啦立不触TsT的蹶哒对熙．光造h删亭砂DAH静f，t棕色的捌广细脚。 七、统计方法 切片中的目i性眨鹰绦胞定譬层剧显微汁数法，每个指粕、2张切片．每张切片仃敬6 个扁倍}t野(×40)，所得订埴资料以芰±s表示，I检验， 结 果 一、一般状态 所有人鼠缺血谚导艄生命体扯稳定，平均心事t26I±42)谈／分，平均呼吸‘68=24) 泌一’分，无缺氧缸象，肛温68℃～37．2℃，照射局部颅骨表面温度38．0℃一一388。C。均无 明显胺体瘫痪。缺血纽较未缺血耀犄神莲缩，活动及摄食减少，海风藤斗预圻上=述症状眨 博征冠蹦髓变化。 二、血脑屏障完整性及梗死灶大小 对照组所有丈鼠血脑肼障完栏，无攻晚红渗出，TTC染色历未见梗死灶。实骑绀人 鼠j：光照24小时厉可见光照匿泼虹色染料渗出，以A组渗出鞍轻。_rT℃染色后1+fl顺口f 兜_I!}!区出现圆形苍自色梗死I}，部位恒定，其中A绸嚆灶直径与B、C两组柑比譬无到 锃蔗异，但存a：减少趋势‘附表1。提示对照蟠无血脑屏障破坏，缺血组血脑肼障破坏明 显，海风藤干预后破坏、减轻(陶略)。 三、病理学观察：光镜F，对照组血管、细胞形态正常，分布均匀，无衄栓形成。 实验组光照缺血岳病灶t1，心群神：明疆卉勺喊水肿、神经细胞聪失及神经细胞坏死，m墒计周 粥除神经细胞脱失、