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第二届全国环境化学学术报告会论文集 蔬菜中有机磷农药残留快速检测的分光光度法研究 何颖康天放张涛 北京工业大学环境与能源工程学院，北京，100022 N 摘要：^鸡脑为酶源提取了乙酰胆碱酯酶，并将其用于酶抑制分光光度法检测蔬菜中的有机磷农药残留， 获得结果满意． 关键词；乙酰胆碱酯酶，有机磷农药，分光光皮法 V V y 0 前言 有机磷农药是目前广泛使用的一类毒性比较强的农药产品，为保障食品安全．开发有 机磷农药快速检测的新技术受到了人们高度重视．基于酶抑制原理的分光光度法是一类比 较常用的快速检测农药残留的方法Ⅲ．不同种类的酶对该方法的灵敏度影响很大，为了提 高该方法的检测灵敏度，人们对许多动物来源的胆碱酯酶进行了筛选Ⅲ．目前常用于提取 乙酰胆碱酯酶(ACHE)的酶源主要有：猪脑、鼠脑、蝇头、蜜蜂头、电鳗、马血清等．本 文以鸡脑作为酶源，从中提取了AChE，这种提取AChE的方法简便，所需原料廉价．本文 对该酶活力进行了测定，并用于实际样品的检测． 1 实验部分 1 1主要仪器试剂 所有的分光光度法实验在722型分光光度计(上海第三分析仪器厂)上进行，用PHS一3C 型酸度计(上海伟业仪器厂)测定溶液酸度．二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和乙酰硫代胆 碱(AsCh)购自SIGMA公司，农药为40％氧化乐果乳油(河北新兴化工有限责任公司)、 50％对硫磷乳油(天津市人民农药厂)、40％辛硫磷乳油(山东和乐集团乐陵农药厂)，分别 以丙酮为溶剂配制成1000 mg／L的储备液，农药浓度根据所标示的有效成分计算． 1．2酶的提取及酶活性测定 将鸡断首，迅速取出鸡脑，用0．001mol／L磷酸盐缓冲溶液(pH7．5)冲洗净余血，将 鸡脑破碎匀浆，加入1．0mL0．7％的曲拉通X-100，搅拌混匀之后，放入离心管中以2500r／min 离心5min，重复离心3次，取上清液作为酶源．以上操作均在O一4℃进行”’． 将提取的酶原液分别稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍，取6支洁净试管， 往每支试管中加入一种稀释倍数的酶液0．50mL和浓度为1．0mmol／L的AsCh溶液1．OmL， 在27C水浴中温育lOmin后，加入2．OmL1．Ommol／L的DTNB磷酸盐缓冲溶液，在412nm 7．5)作空白，测量其吸光度“’，实验重复3次． 处以0．001mol／L磷酸盐缓冲溶液(pH 1．3有机磷农药的分光光度测定法 底物AsCh在AChE的催化作用下水解生成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱与DTNB发生显色 反应，使反应液呈黄色，当有机磷或氨基甲酸酯类农药存在时，AChE的催化活性部分或全 部受到抑制，底物就不能被酶水解或者水解速度很慢，从而显色程度降低，直至不显色。 垆，V 第二届全国环境化学学术报告会论文集 往6支洁净试管中分别加入稀释4倍的AChE液各0．50mL，其中5支试管中分别加入10mg／L、 缓冲溶液代替农药溶液，以该试管中的溶液作为空白，然后分别加入1．0mmol／L的AsCh 的DTNB磷酸盐缓冲溶液，在27。C水浴中温育10min后，在412nm处测定吸光度，实验重复 3次按下式计算抑制百分率： ，(％)=[(AA十自一4A#＆)／AA±自]×100 式中△A，口是显色前后空白溶液的吸光度之差，AA#n是显色前后样品溶液的吸光度之差． 2结果与讨论 21酶活力测定 实验结果表明，酶原液的稀释倍数为2、4、8时，水解AsCh的效果较好，放置一个月之 后，活力均有所下降．当酶原液被稀释32倍之后，活力迅速下降．因此本文选用稀释4倍的酶 液． 表1 不同稀释倍数的酶液活力的测定 22不同农药对酶的抑制作用 按照本文提出的方法，测定不同种类不同浓度的有机磷农药在相同反应条件下的吸光 度，从而计算出其对AChE的抑制率．实验结果表明从鸡脑提取的AChE对有机磷农药比较 敏感．对硫磷、辛硫磷和氧乐果在0．0010mg／L一5．0mg／L的浓度范围内，百分抑制率与其 23．0319c+81．43，其中，代表抑制百分率，C代表有机磷农药浓度，相关系数分别为0．990、