pComb3-KGF活性肽构建和促进表皮细胞增殖的研究.pdfVIP

叭H了，{卜里DK、 ．提上睑肌剧 发现提上睑剧 乍a触沙I}口 pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究 宗宪磊a姜笃银b付小兵c a中国医学科学院整形外科医院，北京100144 b山东大学第二医院美容整形烧伤外科和急诊科，济南250033 c解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室，北京 [摘要]目的：构建展示pComb3-KGF活性肽，促进表皮细胞增殖。方法：应用RT-PCR方法获得 4个KGF基因；SpeI和XhoI双酶切目的基因及噬菌粒pComb3，将4个KGF基因亚克隆至pComb3; 应用噬菌体呈现技术，将插入的基因展示于噬菌体表面；抽提纯化噬菌体DNA，进行酶切、PCR和测 序鉴定；应用MTT方法检测pComb3-KGF活性肽促进表皮细胞增殖的作用，应用免疫荧光方法检测 pComb3-KGF活性肽的细胞亲和力，应用RT-PCR方法检测pComb3-KGF活性肽对KGFR、c-Fos和c-Jun 的表达水平的影响。结果：应用RT-PCR方法获得目的基因，并构建在噬菌粒pComb3中，目的基因成 功表达于载体表面；酶切、PCR和测序结果证实目的基因已成功构建在载体中；MTT结果显示4种 pComb3-KGF活性肽均能够促进表皮细胞增殖；免疫荧光检测结果证明其具有较好的细胞亲和力； RT-PCR结果显示KGF及两种pComb3-KGF活性肽能够促进KGFR的表达，4种pComb3-KGF活性肽 促进c-Fos和c-Jun表达的作用均弱于KGF。结论：成功构建展示pComb3-KGF活性肽，能够显著促进 表皮细胞增殖，但促进肿瘤基因c-Fos和c-Jun的表达弱于KGF。 TGF-beta1噬菌体模拟肽抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞活性的实验研究 刘振中1姜笃银1，2*蔡景龙3宗宪磊3张基勋1单菲1，2王文婷1，2 王魏1，2 1山东大学第二医院美容整形烧伤外科和急诊科，济南250033 2山东大学第二医院组织工程研究所，济南250033 3中国医学科学院整形外科医院，北京100144 [摘要]目的 从噬菌体随机12肽库中筛选获得TGF-betal噬菌体模拟肽，并评估其抑制瘢痕疙 瘩成纤维细胞增殖的疗效。方法 以人TGF-betal单克隆抗体为靶，进行4轮生物淘选，ELISA检测单 克隆噬菌体的结合力。对噬菌体DNA进行测序和序列分析。MTT法定量测定活细胞的数量。annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测对成纤维细胞的凋亡作用。免疫荧光测定检测模拟肽与成 纤维细胞的亲和力。实时定量PCR分析方法检测成纤维细胞中NF-κB，CTGF的表达水平。结果 共获 得10种噬菌体模拟肽。MTT结果示4种噬菌体模拟肽(No.7-10)能够抑制成纤维细胞增殖。免疫荧光 测定显示是噬菌体上的模拟肽，而不是噬菌体本身，能够与成纤维细胞相结合。凋亡试验显示4种噬菌 体模拟肽(No.7-10)能够轻度促使成纤维细胞发生轻度的晚期凋亡。实时定量PCR的结果显示噬菌体 模拟肽组(No.7-10)中NF-KappaB和CTGF的表达降低。结论 噬菌体模拟肽可能是通过调节NF-κB， CTGF的表达，调节瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖。噬菌体模拟肽将来会进行体外检测，可能用于防治瘢 痕疙瘩。 [关键词]噬菌体随机12肽库；TGF-betal噬菌体模拟肽；瘢痕疙瘩成纤维细胞；抑制增殖