四川地方山羊品种mtDNA遗传多态性的研究.pdfVIP

2004学术年会 四川地方山羊品种mtDNA遗传多态性研究 张红平，李利，李学伟 四川农业大学动物科技学院，雅安四川625014 摘要：测定了四川7个地方山羊品种(群体)43个个体的线粒体DNA控制区全序列，用 倍型多样性为O．966，遗传多样性较为丰富。建昌黑山羊、阿坝州的藏山羊都有自己独特的单倍型， 与其它品种间都没有共享类型。系统发育表明四川地方山羊有两个母系来源。 关键词：山羊，mtDNA控制区，序列变异性，种群遗传结构，系统发育 线粒体DNA(mitoehondrialDNA，mtDNA)是高等动物唯一的核外遗传物质，具有分子量小 (约15．7～19 5kb)、结构简单稳定、进化速度快、母系遗传等特点。控制区又称D一环区 (displacement—loop 异最大的区域，属非编码区。近年来，对mtDNA结构和功能的研究已成为群体遗传多样性、分子 进化、衰老、疾病诊断、细胞凋亡等领域的研究热点。目前全世界共有山羊7亿多只，其中中国1．43 亿只，是世界上山羊饲养量最多的国家。四川省山羊品种资源十分丰富，在我国养羊业中占有十分 重要的地位。通过对我省地方山羊品种mtDNA控制区序列变异分析，从分子水平上研究其遗传多 样性，为我省山羊品种资源的保护、利用与开发提供科学依据。 1材料和方法 1．1样品采集和DNA提取 共采集了四川省的7个地方山羊品种的血样(表1)，采样过程中，要避免污染，所采个体要符 合品种特征，并且尽可能地避开样本个体之间的血缘关系。每只羊颈静脉采血3毫升，与冻存管中 的DNA保存液按l：1混合均匀，编号后低温保存。用苯酚．氯仿抽提法提取基因组DNA。 表1试验研究所用的山羊品种、数量及其采集地点 2004学术年会 1．2 DNA扩增和纯化、序列测定 28 总的反应体系为50¨1，包括：H206pl，10×buffer 各2 DNA聚合酶(51J／01)o．4p1，MgCl23．0pl，模板DNA 0pl，Taq 生物公司生产的纯化回收柱进行回收与纯化。 Cycle Kit。测序反应产物用乙醇，醋酸钠纯化。纯化后的产物，用ABl310测序仪测序。 Sequencing 1。3数据分析处理 序列结果首先用CLUSTALW程序进行对位排列然后进行手工比对。用分子进化遗传分析软件 (MEGA2 0)确定多态位点；用DnaSP软件(Version3．53)计算各种群的单倍型多样性，种群内的 核苷酸多样性和种群间的序列歧异水平等多态性统计参数。采用Fu等的D+和p统计检验值检验序 验得到的支持率。 2结果与分析 2．1 PCR结果 本实验用优化后的反应体系和条件扩增出山羊线粒体DNA中长度大约1,500 bp的片段，而空 白对照实验未出现扩增产物，这与预期片段大小相符。通过使用内引物和全序列引物的重叠和重复 区全序列比对，发现两者同源性很高，说明本实验扩增和测序的目的DNA片段是山羊的mtDNA 控制区。 2．2序列分析结果 (13．8％．14．4％)和26．0％(25 的控制区序列比较分析，结果共发现74个变异位点，其中单一多态位点17个，简约信息位点56 个，此外在1，075位有一个核苷酸的插入，缺失(图1)。核苷酸多样度为1．686％，这些差异共定义了 27种单倍型，单倍型多样性为0，966(表1)。建昌黑山羊、阿坝州的藏山羊都有自己独特的单倍型， 与其它品种间都没有共享类型。 344囝2004学术年会 表2各单倍型编号及共享单倍型 单倍型 序列名称 单倍型 序列名称 BCWl35 H15 JTBl50，JTBl52，LZB2