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’56· 生物技术 细胞分裂素生物合成相关基因在植物叶片 抗衰老基因工程研究中的应用 张治礼郑学勤 摘要植物叶片的主要功能是进行光合作用，生产植物生长发育和繁殖后代所需的营养物质， 是植物生物产量的主要来源。由于植物叶片衰老的起始时间决定了冠层光合作用时间的长短， 因此叶片衰老成为许多农作物生物产量的重要限制因子。随着植物分子生物学和植物基因工程 技术的发展，利用细胞分裂素生物合成相关酶基因有效控制植物叶片衰老进程成为可能，为提 高农作物产量提供了一条新的途径。本文综述了细胞分裂素生物合成相关酶基因及其在植物叶 片抗衰老基因工程研究中的应用，并对叶片抗衰老基因工程的应用前景进行了展望。 关键词细胞分裂素基因植物叶片抗衰老基因工程 用细胞分裂素处理离体叶片，可以延缓离体叶片衰老，处理黄叶可以使其返青；在叶片衰 老期间。细胞分裂素含量迅速下降，去根处理可以促进衰老等现象表明，细胞分裂素在控制叶 片衰老进程中具有重要的作用(Singh，1992)。因此，与细胞分裂素生物合成相关酶基因被认为 在利用基因工程手段控制叶片衰老、提高作物产量的研究中最具有利用价值和潜力。自1984年 (G．F，Barry)编码细胞分裂素生物合成过程中最重要的一步限速酶基因——口时基因被从根癌 素生物合成调控相关的基因并利用这些基因开展了一系列的调控细胞分裂素生物合成进而控制 叶片衰老的研究。 1．1IPT基因在植物抗衰老基因工程研究中的应用 IPT全称异戊烯基转移酶，是催化细胞分裂素生物合成中第一步反应的关键酶，也是最重要 et et al、，1984；Barry 的限速酶(Akiyoshi 粒中克隆了tmr基因，并通过在大肠杆菌中的表达分析，确认了该基因编码的蛋白就是异戊烯基 转移酶。随后，人们利用该基因开展了大量的基因工程抗衰老的研究工作。研究结果显示 et et et eta1．， a1．，1994；Medforda1．，1989；Smart (Schmullinga1．，1989；Smigochi，1991；Hewelt et et et 1991；Van[ovenal，1993；Faiss81．，1997；Li zie et M．J al，1998)，表达IPT的转基因植株表现为细胞分裂素含量增加，叶片衰老明显延迟， 但植株的形态也同时发生了许多不正常的变化，如叶片变小、叶型变圆，不能形成根或形成的 Van 根不能伸长，顶端优势丧失等。1993年K／tieRLoven等人利用热激启动子Phsp70使册基因 在植物体内进行了特异表达。结果发现，在热激情况下，转基因植株的侧芽数和叶片内的细胞 分裂素含量明显大于对照，但根的生物量却显著下降。NckenzieM．J等人(1998)采用铜诱异 型特异启动子也对【Frr基因在植物体内的特异表达进行了研究。研究结果进一步证实了上述现 象，并发现转基因植株的侧芽和叶片数都明显增多。 K 1994年LohmanN．等从拟南芥中克隆出一个衰老特异性很强的正调控基因SAGl2，随后 Gan S(1995)等把SAGl2的启动子分离出来，连接上肼基因组成一个特异的抑制衰老的嵌合 基因．当植株叶片开始衰老时，植株体内细胞分裂素含量下降，特异衰老基因SAGl2启动子启 动，IPlr基因表达，细胞分裂索含量增加，叶片衰老延迟；而叶片衰老延迟又使启动子关闭， 生物技术 ·57· IPT基因不再表达，从而起到自我调控作用，防止了细胞分裂素的过量产生，解决了I门基因连 接其它启动子的转基因植株表现的形态上的异常现象。这一嵌合基因的构建为我们人为延迟植 株叶片衰老，提高产量提供了可能。他们把此基因借助农杆菌将其导人烟草中发现，转PSAG一 胛嵌合基因的烟草叶片比未转化的对照植株晚40天衰老，开花数提高60％，种子产量提高 50％，生物量提