紫杉醇诱导的凋亡细胞微量元素含量改变的同步辐射的研究.pdfVIP

中国癌症研究进展 紫杉醇诱导的凋亡细胞微量元素含量改变的同步辐射研究 陈丽荣郑树陈于法张苏展黄宇营 恶性肿瘤细胞在转化过程中除了细胞增殖相关基因转录表达明显增高以外，往往伴随有 细胞凋亡机制的障碍，表现为诱导细胞捅亡的相关基因转录表达减弱，甚至处于失活状态。在 恶性肿瘤细胞转化过程中，微量元素含量的变化与恶性肿瘤的发生有关。但是，在细胞凋亡发 生过程中，是否存在微量元素含量改变并具有生物学意义，目前尚不清楚。我们应用抗癌药紫 杉醇诱导人乳癌细胞Bcap37发生凋亡的模型，采用同步辐射x射线荧光检测技术对凋亡细 胞的微量元素进行定量分析，旨在探讨微量元素在细胞凋亡发生过程中潜在的生物学意义。 拣滟与赢法 nm01几、20 nmol／L、50 紫杉醇、秋水仙碱、鬼臼乙叉甙和放线菌酮工作浓度分别为100 pmol／L h不等。 和20 ml中，处理细胞12，24，48和72 tmaol／L。溶于培养液(DMEM)10 2．DNA裂解片段分析人乳癌细胞处理组分为两组，一组经紫杉醇分别处理3，12，24， h。另设未处理对 48和72h：另一组经紫杉醇、秋水仙碱、鬼臼乙叉甙和放线菌酮分别处理72 清液经酚／氯仿／异戊醇(25：24：1)提取和乙醇沉淀，RNA酶消化处理后，重新提取和沉淀。 2以6倍电泳加样缓冲液，经1．5％琼脂糖凝胶电泳，DNA条带在紫外线灯下观察摄片。 3．同步辐射检测 用胰酶消化分别收集紫杉醇处理12，24，48和72h的细胞，以及秋水 仙碱、鬼臼乙叉甙和放线菌酮处理24和48h的细胞，同时收集未处理的对照细胞。用PBS洗 涤细胞2次，加入50％乙醇固定细胞24h。细胞计数，使细胞浓度为3万个／m。Kapton膜经 无水乙醇处理，平坦地铺在玻璃板上，用组化记号笔在膜上画一个直径1∞的圆内，加入30 m的细胞悬液，使细胞平坦均匀地覆盖在膜上。将阴干的膜平坦地固定在幻灯片架子上。设 立空白对照。同步辐射检测是在北京中科院高能物理研究所国家正负电子对撞机同步辐射实 作者单位：310009杭州，浙江大学肿瘤研究所(陈丽荣郑树陈于{击张苏晨)；中国科学院高能物理研究 所(黄宇营) 紫杉醇诱导的翩亡细胞敲量元煮古量改变的同步辐射研究 2[13 Si(Li)半导体探测器距样品距离为3cnl，成角45*，照射时间为100s。 4，数据处理样品中所古各元素被同步辐射光激发后产生的荧光产额以能谱形式记录并 储于磁盘中，应用专用软件进行解谱，得到各元素的相对产额值。对每一样品各元素相对产额 值按流强加mA和氩气(Ar)峰面积归一的方法进行处理和标准化，得到样品单位面积内各种 元素的相对台量值。 5．统计学处理采用两个样本均数差别的显著性检验，t检验。 结 果 1．紫杉醇等药物诱导人乳癌细胞发生凋亡 人乳癌细胞Bcap37经紫杉醇分别处理3． 12，24，48和72h后，DNA裂解片段电泳显示，在处理48h可见明确的“阶梯状”DNA条带，在 72 h，与紫杉醇 hDNA条带更为明显。秋水仙碱、鬼臼乙叉甙和放线菌酮处理Beap37细胞72 一样可诱导细胞发生凋亡。 2．紫杉醇诱导Bcap37细胞凋亡过程中不同时间各元素含量变化在本实验的凋亡细胞 程中，处理48h时，凋亡细胞元素zn和P相对含量明显增高，与对照组比较差异有显著性(P 紫杉醇处理Bcap37细胞不同时间各元素相对含量变化见表1。 袭1紫杉醇诱导的