枯草芽孢杆菌XM16菌株抗菌蛋白的提纯和性质研究.pdfVIP

第二届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会 1 枯草芽孢杆菌XM6菌株抗菌蛋白的 提纯与性质研究 1．辛玉成李宝笃 2．姜士聚李洪刚 (1．莱阳农学院莱阳2652002．山东省农药检验所济南250013) 摘要：枯草芽孢杆菌(Bacilius G-i00及DE32 霉心病等多种病原真菌具有强烈抑制作用的拮抗菌株。XMl6菌株培养液经硫酸铵分级盐析和Sephadex 性；对loo。C以上高温稳定；通过氨基酸组分测定分析，该抗菌蛋白含有12种不同的氨基酸，含量最高的3种氨基酸 alternata等真菌 为谷氨酸Glu、天门冬氨酸Asp和精氨酸Arg，未测定出组氨酸His等。此抗菌蛋白对A1ternaria 病原的抑菌机理主要表现为：抑制病菌孢子萌发，使孢子发芽异常：使菌丝畸变，细胞壁溶解，原生质泄漏。XMl6菌 株抗菌蛋白对10种测定的病原真菌，均具有良好的抑制效果，表明对病原真菌具有广谱的抑制作用。 关键词：枯草芽孢杆菌抗菌蛋白纯化性质 枯草芽孢杆菌是一类具有抑制病原生 1材料与方法 长发育、不污染环境和对人畜无害的非致 1．1XMl6菌株培养液的制备 病类细菌；自40年代有报道在其培养液中 普遍存在着蛋白类物质后，世界各国对它 12g／L、葡萄糖20g／L、琼脂15g／L)上 作为一种生物控制因素进行了广泛研究， 培养48h，移于AYD培养液中，在30。C、 ii0 取得了一定的进展|1~31。目前，植物抗病基 r／min振荡培养72h，用于试验测定。 1．2 因工程发展迅速，如果将编码此种蛋白的 XMl6菌株抗菌蛋白的分离与纯化 基因转入植物体内，使该植物获得合成这 类抗真菌蛋白的能力，则该植物同样能显 分9个浓度，分别从XMl6菌株培养液中提 示出抗真菌性。因此，在确定了枯草芽孢 取抗菌蛋白粗提物，经透析后，按500ug／L 杆菌XMl6菌株对植物病原真菌的抑制作用 al 和病害的防治效果的基础上|4’51，分离纯 ternata进行常规培养，测定菌落直径， 化出该菌株的抗菌蛋白，并搞清其氨基酸 比较抑菌效果，确定最适饱和度。 组成等基本性质，为植物抗真菌病害基因 1．2．2柱层析浓缩的粗提液，采用 工程，提供XMl6抗菌蛋白基因的技术资料Sephadex 是十分必要的。本文是对XMI6菌株抗菌蛋 alternata为指示菌测定洗脱液活性，确定 白的分离提纯号l生质的研究结果。 活性上、下限，合并洗脱液，浓缩；再加 mol／L 到DEAE—cellulose柱上，用O～1．0 第二届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会 氯化钠液洗脱，同样以A1ternaria高速氨基酸分析仪，进行氨基酸种类及其 alternata测定洗脱液活性，确定活性组含量的分析与测定。 1．4 分，用蒸馏水透析脱盐，浓缩。 XMl6菌株抗菌蛋白抑菌作用 1．2．3分离提纯步骤将XMl6菌株发酵培 1．4．1抑菌谱的测定采用标准杯碟法， 养液低速离心一取上清液一硫酸铵分级盐 检测提纯的抗菌蛋白(500