聚丙烯酰胺凝胶电泳制备丙种球蛋白.docVIP

聚丙烯酰胺凝胶电泳实训步骤 一、实训原理： 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳是根据被分离物质所带的电荷多少及其分子的大小，形状的不同，在电场的作用下，产生不同的速度而分离的方法。 它具有分子筛效应、电荷效应、浓缩效应三重作用。在这三重效应的共同作用下使血清蛋白中不同的蛋白质分离开来 二、实训器材与试剂 （一）器材 电泳仪 电泳槽 注射器 长针头 吸管 培养皿 （二）试剂 1. 三羟甲基氨基甲烷（简称Tris） 2. 贮备液的配制：按下表配制A、B、C、D、E、F各贮备液，然后冷藏于4℃条件下，以防变质。 3. 染色液： 0.05%氨基黑10B溶于7%醋酸溶液，或者用灵敏度高5倍考马斯亮蓝R250溶液染色。 4. 脱色液：7%醋酸溶液。 5. 电极缓冲液（pH8.3甘氨酸-Tris缓冲液）：甘氨酸28.8g，Tris0.6g加水定容至1000ml. 6. 示踪剂：0.01%溴酚蓝溶液 四、操作步骤： 1.制胶： 取一支长10cm左右的玻璃管，在一端套上乳胶帽。 1）7%聚丙烯酰胺凝胶（PH8.9，分离胶）： 将试剂按A:C:H2O:F=5ml：10ml：5ml：15ml比例混合于一烧杯中.用滴管将分离胶加入玻璃管至3/4高度，表面再加少量水覆盖，在烘箱中25~35℃下聚合，当有界面出现时，表明已经聚合，吸取分离胶表面的水分。 2）2.5%聚丙烯酰胺凝胶（pH6.