α-氧代膦酸衍生物对酶活性影响的研究(Ⅳ)——Hwsf对绿豆丙酮酸脱氢酶系的作用和影响.pdfVIP

!里些三兰垒奎垫童些至垦叁苎±二旦兰叁望塞叁 ：!!：． Q一氧代膦酸衍生物对酶活性影响的研究(IV)+ ——．Hwsf对绿豆丙酮酸脱氢酶系的作用与影响 袁均林1 贺红武2 (’华中师范大学生命科学学院 2华中师范大学农药化学研究所武汉430079) 摘要以不同浓度的O，0t二甲基—证一【2，4一二氯苯氧乙酰氧基1-乙基磷酸酯(简称为Hwsf)t在体外处理绿 豆丙酮酸脱氢酶系．其结果表明。Hwsf对绿豆丙酮酸脱氢酶系具有强抑制活性·其CI，0为00011％· 丙酮酸脱氢酶系是植物体内糖有氧代谢的一种非常重要的酶，而糖的有氧代谢又与植 物体内的其它物质代谢，如脂代谢，氨基酸蛋白质代谢密切相关，若丙酮酸脱氢酶系被抑 制，则导致植物体不能充分利用氧，植物细胞的呼吸作用及其它的代谢作用严重受阻，同 时由于氧不能被利用而造成体内氧积累过多，从而影响植物体内活性氧代谢系统的平衡， 增加活性氧在细胞内的含量，如超氧阴离子自由基(O。：)等，当细胞内存在大量自由基时则 促进膜脂质过氧化或膜脱脂作用，则将导致细胞膜受损、破坏，最后引起细胞死亡Il—I。 近年来有关农药的生物化学作用机制的研究结果表明，a一羰基膦酸(次膦酸)酯(盐)对 植物体内的丙酮酸脱氢酶系具有抑制作用【·I而表现出除草活性。为了设计新型的丙酮酸脱 氢酶抑制剂，我们利用上述生化研究结论。运用生物合理设计的方法，设计了多种类型的 d一氧代膦酸衍生物p1。其中取代苯氧乙酰氧基烃基膦酸酯显示了良好的除草活性，为了探 索这类化合物的除草作用机理，我们在研究了O，O一二乙基一a一【4-氯苯氧乙酰氧基膦酸酯 (ETBP)对水稻幼苗抗氧化酶活性的影响嘲以及O，O一二甲基一Q一[2，4一二氯苯氧丙酰氧基】 丙基膦酸酯(HJCE)对绿豆幼根抗氧化酶的影响【61以后，本文重点研究了化合物Hwsf对丙酮 酸脱氢酶系的影响，以便阐明Hwsf类化合物的生物活性机制，证实我们所提出的该类化 合物为一类潜在的丙酮酸脱氢酶系抑制剂的假设，从而为新型除草剂的设计和合成提供必 要的理论指导。 实验材料与方法 1材料 绿豆(鄂绿2号)购于湖北省农科院，O，O一二甲基一d一[2,4一二氯苯氧乙酰氧基】一乙基 膦酸酯纯品由本课题组合成提供。 2线粒体的提取 将绿豆选种、浸泡露白后上网发芽，28C恒温培养至幼苗10cm左右，加营养液(1％ 上清液270009离心45rain，收集沉淀，再用营养液洗二次沉淀，收集沉淀，乙醇脱水，风化， 即得干线粒体。 TES 称取线粒体粉剂按20rag·ml。加入匀浆液(25mmol·L-1 pH7．5)匀浆，270009离心 15rain取上清液(即丙酮酸脱氢酶液)，备用。 3 酶抑制实验 O TES 0001％和0．00001％，混匀，25C保温25min，再分别加入反应混合物和底物[25mM pH7．5， lmM lm／vl mM NAD+，0．13COASH，4raMTPP，1mM丙酮酸钠1。混合 MgCl2CySH，1mM 平衡1分钟后在340nm处测其生成的NADH。 以每min变化0．010D值为一个酶的活力 单位。 结果与讨论 不同浓度的Hwsf处理丙酮酸脱氢酶后，测其酶的活力单位及其Hwsf对丙酮酸脱氢 ·国家自然科学基金(Nos 230532)资助项目 ，教育部重点及骨干教师(Nos．214607 ·96· 中国