心肌组织T-管结构的扫描电镜的研究.pdfVIP

Chin．E]eetr Soe 电子显微学报J Microsc 2001年 467 20(4)：467—468 心肌组织T一管结构的扫描电镜研究 杨勇骥1，张致峰2，苏金莲2，汤莹1，宋田斌1，叶煦亭1 (第二军医大学1基础部生物物理研究所，2长海医院核医学科，上海200433) 心肌兴奋一收缩偶联由于其明显的理论和lI缶床意义一直受到关注。肌浆网(sarcoplasmic retieulum SR)及肌浆网内ca2+释放在心肌兴奋．收缩偶联机制中起着重要作用。在肌兴奋一收缩 偶联机制中起重要作用的单元为三联管即T-管、肌浆网。由透射电镜观察得出，T一管是肌细胞膜 凹陷垂直伸向细胞浆的横管。我们采用扫描电镜对心肌纤维与T_管的关系进行了研究，取得了 有意义的结果。 材料与方法 正常豚鼠(体重3009，由第二军医大学动物中心提供)，颈椎脱位。取其心室部位的心肌组 织，用玻璃分针小心的将心组织分离为长约1．5em，宽约5mm的肌纤维束。将分离出的肌纤维束 放人任氏液中静息约10rain，待其松驰。 用两把尖头镊子小心的将肌纤维束一拉为二，置于4％多聚甲醛一1％戊二醛固定液混台固 定液中固定4h，PBS漂洗三次(每次间隔30rain)。再用1％锇酸固定液继续固定4h。容器内放2 —4粒氯化镁(抗氧化)。锇酸回收备用。PBS充分漂洗后，样品再次置于0．1％锇酸中lh。PBS 充分漂洗后，样品放人回收的锇酸固定液中lh。锇酸固定后，PBS充分漂洗。锇酸处理标本在 4℃中进行。 标本用乙醇系列脱水，每次20～30min，然后放入醋酸异戊酯中两次，每次15rain。采用日立 rain， HCP-2型临界点干燥仪对样品进行干燥处理，干燥处理前，先用CO：与醋酸异戊酯置换15 此时可少量放气。随后再进行临界点干燥。干燥后放气时间维持lh。用导电胶粘于铜台上并 用离子溅射仪镀膜处理。采用日立S-520扫描电镜观察。 结果 扫描电镜下心肌肌纤维束结构清晰可见，肌纤维柬中包含有多根肌原纤维。将肌纤维束表 面再放大，可见两种排列方式不同的管状结构。1、肌纤维束表面管状结构排列整齐划一，状如螺 线管，间隔约0．7um(见图1)；且该管状结构包裹在多根肌原纤维表面，该管状结构应是T．管结 构。2、肌纤维束表面管状结构排列如网状，间隔约1．3p．m(见图2)，从形态学角度看，管状结构与 图1的管状结构无差异，只是排列方式不同。 讨论 三联管是心肌兴奋收缩偶联过程最重要的细胞器。7r-管、肌浆网(sR)及cB2+在心肌兴奋．收 缩偶联机制中起着重要作用，但在心肌兴奋．收缩偶联时，ca“如何在肌浆阿中被“刺激”后而释 放，是多年来细胞生物学最感兴趣的研究热点之一，也是一直未能在形态学上得到证实的难题。 心肌兴奋一收缩偶联功能的产生，实际上是T．管去极化到肌浆网内cf+释放的过程。在这个过 程中，ca“起着非常重要的作用，肌膜、T一管及肌浆网在这个过程中经历了一系列形态及功能上 基童项目：国家自然科学基垒赞助项目(批准号 瓤E职l Electr 电子显微学报JChin MicmscSoc 20