耐尔蓝与吸附态单双链DNA作用的电化学研究.pdfVIP

C32 耐尔蓝和吸附态单双链DNA作用的电化学研究 鞠规先+叶永康朱永林 (南京大学化学系．210093) 摘要：用电化学方法研究了耐尔蓝∞)分剐与吸附在金电极L的单链(踞)’双链 (ds)4、牛胸腺DNA的作用．和裸金电极以及吸附修饰的单链DNA电极相比，在 吸附修饰的双链DNA电极上，NB的峰电流显著增走。它在裸金电极、ssDNA／Au 电极和dsDNA／Au电极上的电子传递速率常数分别为1．4-．k0．1、1．21-0．02和2．91-0．2 耐尔蓝通过静电作用与ssDNA结合，而在与dsDNA作用时。显示出静电扣嵌入 ~f1，而在舍有0．01 Mo．两者的键合位点数分别为0．9-．t-0．02和1．6：tO．1．耐术蓝在ssDNA／Au电极和 dsDNA／Au电极上响应电流的不同表明耐尔蓝可以作为DNA杂变电化学指示荆． 关键词：耐尔蓝，生物侍感器，嵌入作用 DNA和其它分子之间的相互作用与DNA的复制和转录、基因突变、基因药物以及一些 遗传疾病等息息相关。因此，研究DNA和其它分子之间的反应在生命科学中非常重要，在临 床治疗【l瑚和科学理论的研究m上都具有非常重大的意义。电化学方法被广泛地应用于DNA与 其它分子在溶液中以及在修饰电极上作用的研究。 耐尔蓝是一种阳离子吩嗪类染料，具有平面杂环的刚性结构．它的平面疏水的吩嗪部分 被认为容易嵌入到DNA螺旋的非平面的内部，即所谓的能与DNA进行嵌入作用。本文研究 了bib分别与溶液中、电极表面上的单、双链DNA的作用机理。得到了可与文献报道相比较 的NB与ssDNA、dsDNA作用的键合常数。结果表明，耐尔蓝作为电化学指示剂．在电化学 DNA传感器的制各中具有很大的潜在价值。 l实验部分 I．I仪器与试剂 M mM 8．0Tris-HCl和l 公司(美国)。DNA溶液(20“g／m1．含有0．01pH EDTAfrE缓冲溶液))， DNA溶液于4℃以下贮存。所有其它试剂均为分析纯．所有溶液均用二次水配制。 1．2DNA吸附修饰电极的制备 金电极(3mm)依次用砂纸和Ab铂悬浊液抛光，直至电极表面呈光滑镜面。然后分别在 丙酮和二次水中超声3分钟，接着将电极放在1MH2sq溶液中。在0V到+1．57V的范围内 扫描直至得到稳定的循环伏安图，再在0v下极化3分钟。用二次水清洗电极后立即在电极表 mlo 面上滴加3．5IlI的1．0 dsDNA或者ssDNA溶液．让其过夜晾干．然后将电极在二次 mg 水中浸泡至少4小时，再用二次水冲洗掉电极表面上未吸附的DNA．这样可得双链DNA修 饰电极或者单链DNA电极，标记为dsDNA／Au和ssDNA／Au电极。 2结果与讨论 2．1耐尔蓝与溶液中dsONA反应的键台常数和键合位点数 323 在400mVso扫循环伏安图，得到一对电位差为72mV的氧化还原峰，式量电位酽 f酽’=腰阳+昂∥动为．385mV。在溶液中逐渐加入双链小牛胸腺DNA后，NB的峰电流逐渐减 M 7．4 小。在0．01pH M M．1．当该溶液中加入0．05 数为(5．9±0．2)X104 NaCI后，测得键合位点数为1．6+-0．1，键合常 数为(3．2±0．03)x104M■在相同的pH条件下，离子强度的增加导致了键台常数的下降，也即 导致了NB和dsDNA键合能力的降低，表明NB和dsDNA的作用包含静电作用机制。 2．2耐尔蓝和dsDNMAu殛ssDNMAu电极的反应 如上所述．式量电位产生负移是由于bib与电极上所吸附的DNA螺旋发生静电作用所致， 因此，静电反应也应当存在于NB与吸附态DNA的反应中。经过变性的ssDNA吸附在电极 表面上后，电极表面上的DNA链数目应比dsDNA／Au电极表面上的DNA链多，如果NB在 dsDNA／Au电极上的式量电位的