1_质粒DNA的提取酶切及浓度检测.pptVIP

实验5 质粒DNA的提取 质粒的概念 质粒：质粒是细菌染色体外的遗传物质，大小在1~200kb之间，大多是具有双股闭合环状结构的DNA分子，通常以超螺旋状态存在于细胞浆中。 质粒提取目的 PCR的模板 质粒作为克隆载体 (研究目的基因时，常需要提取质粒) 质粒提取的方法与原理 碱裂解法 SDS裂解法 煮沸裂解法 氯化铯-溴化乙锭梯度离心法 试剂盒法 质粒小抽试剂盒 原理：把硅胶薄膜的优点与经典的碱-SDS裂解细菌细胞法结合起来。 优点：操作简便、节约时间、性/价比高。 使用者需备 10,000xg以上高速离心机 1.5ml的灭菌干净小离心管 灭菌去离子水(或TE缓冲液) 无水乙醇 注意 一、使用前往准备好的SolutionI中加入RNase A， 二、浓缩的Wash Buffer需用乙醇稀释： 三、稀释后的DNA Wash Buffer需室温保存； 四、所有步骤必须在室温下操作。 实验操作步骤 增殖细菌、扩增质粒 裂解菌体、获取质粒 抽提质粒、分离纯化 结果鉴定 质粒DNA提取范例： * 碱裂解法 溶液1 50mmol/L葡萄糖， 10mmol/L EDTA， 25mMTris-HCl pH8.0。 溶液2