牛羊坏死杆菌保护性抗原的筛选与鉴定.pdfVIP

２０１３ 年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会 暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会论文集 牛羊坏死杆菌保护性抗原的筛选与鉴定 吕思文，张红，郭东华∗ （黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 １６３３１９） 摘要：本研究旨在筛选牛羊坏死杆菌基因工程亚单位疫苗的保护性抗原。 试验将坏死杆菌白细胞毒素及溶血素基因作为 研究材料，利用大肠杆菌原核表达系统来表达坏死杆菌白细胞毒素及溶血素的重组蛋白，并利用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ技术从中筛 选出坏死杆菌白细胞毒素及溶血素蛋白主要的保护性抗原区，最终选择出免疫保护性强的重组蛋白作为预防牛、羊腐蹄病 的重组亚单位疫苗候选抗原。 结果表明，成功筛选出白细胞毒素（ｌｋｔＡ）和溶血素（ｈｌｙ）毒力因子的８个中和抗原表位区，成 为探索牛坏死杆菌高效基因工程亚单位疫苗的候选抗原，为牛坏死杆菌病的有效防治提供理论基础。 关键词：坏死杆菌；基因工程亚单位疫苗；白细胞毒素；溶血素 Ｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ Ｌｖ Ｓｉｗｅｎ，Ｚｈａｎｇ Ｈｏｎｇ，Ｇｕｏ Ｄｏｎｇｈｕａ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｂａｙｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｄａｑｉｎｇ Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ １６３３１９） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ａｉｍｅｄ ａｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ ｔｈｅＦｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ ，ｌｋｔＡ ａｎｄｈｌｙｗｅｒｅ ｃｈｏｓｅｎ ａｓｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅＥ ｃｏｌｉ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｇｅｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｋｔＡ ａｎｄ ｈｌｙ ，ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｏｆ ｌｋｔＡ ａｎｄ ｈｌｙ，ｆｉｎａｌｙ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｂｅ ｔｈｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｃａｎｄｉｄａｔｅｓｔｏｐｒｏｔｅｃｔｔｈｅｆｏｏｔｒｏｔｏｆ ｃａｔｔｌｅｏｒ ｓｈｅｅｐＴｈｅｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｓｔｈａｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｅｉｇｈｔ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇｅｐｉｔｏｐｅｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅ Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅｆａｃｔｏｒ ｔｏ ｌｋｔＡ ａｎｄ ｈｌｙ Ａｓ ｔｈｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ ｏｆ ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｓｕｂｕｎｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ，ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓｆｏｒ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ；ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｓｕｂｕｎｉｔ ｖａｃｃｉｎｅ；ｌｅｕｋｏｔｏｘｉｎ，；ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ 反刍动物腐蹄病是世界范围内发生的一种传染病，其特点是发病率高、死亡率低，最大的危害是 导致感染动物生产性能下降乃至淘汰（郭东华等，２０１１）。 我国该病的发生也非常严重，它给牛、羊 养殖业带来了巨大的危害，尤其是奶牛业的发展，所以，腐蹄病的免疫预防工作对牛、羊养殖业的健 康发展具有重要的意义。 目前，国内外牛、羊腐蹄病的预防主要是依靠传统灭活疫苗的免疫，实践也 证明灭活疫苗对腐蹄病的防治发挥了重要作用，但是，不可回避的是灭活疫苗存在着细菌大量培养 困难、免疫效果差和天然毒素引起严重的副反应等缺点，为该疫苗广泛的应用带来了困难。 因此，研 制能够替代传统灭活疫苗，同时具有抗原制备方便、免疫效果好、毒性作用小和廉价的腐蹄病新型基 因工程重组亚单位疫苗