牛结核杆菌病PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

RFT是一种新型的半合成利福霉素类抗生素与RFP相比，具有高效、长效和低毒三大特点。 对于RFP胃肠道反应严重，肝损害较严重的患者考虑使用。通过临床观察，化疗的完成率、病变 好转情况和痰菌控制情况，与RFP组接近，根据监测情况给临床医生选择药物治疗增加了途径。 是，在遵照抗痨治疗5大原则的基础上，结合本地区流行特点，制定合理用药、个体化用药的具体 措施，就能够使化疗方案顺利的实施，从而使结核病得到良好控制。通过个体化优化方案，减少 了药物的不良反应，提高患者的生活质量，达到控制结核病，控制传染源，已成为医师和患者共 同追求的目标。 牛结核杆菌病PCR检测方法的建立及初步应用 昊位珩杨茂生杨莉徐景峨文才智 贵州省畜牧与医研究所55．0005 贵州省农科院550006刘辉 贵阳省畜禽品种改良站550005廖梅 牛结核病(bovine bovis)和结核分枝杆菌 tuberculosis)是由牛的分枝杆菌(Mycobacterium (Mycobacteriumtuberculosis)所引起的一种人畜共患慢性传染病，牛结核病自它存在的那一天起， 该病就一直危害着人类和动物的健康，并给整个社会造成了巨大的经济和物质损失。该病被国际 兽疫局(OIE)列为B类动物疾病，可通过接触病牛或摄入受该菌污染的牛肉、牛奶及奶制品等 从而从牛传染到人，其传播和流行影响着畜牧业的持续发展和人类自身的健康。传统的牛结核分 枝杆菌检测方法主要是表型分类法，是以形态和理化特性为依据，耗用的时间比较长，一般是 快速、特异和敏感等优点已广泛应用于临床标本的检测中。我们通过研究，建立了快速、敏感、 特异的诊断牛结核病的PCR检测方法，并应用于奶牛奶样标本的检测中，取得了较好的结果。因 此，牛结核分枝杆菌PCR诊断方法的建立，可望为牛结核病的流行病学调查及该病的诊断提供新 的方法。 1材料与方法 1．1参考菌株 牛分枝杆菌参考菌株(编号为93006)，购自北京药品生物制品检定所。人型结核分枝杆菌 参考菌株CNTBMk株，购自贵阳医学院微生物教研室。 1．2主要试剂 ＼ BacteriaDNA 细菌基因组DNA提取试剂盒(TIANamp Kit)，目录号为DP302，血液／细胞／组织 GenomicDNA 基因组DNA提取试剂盒(TIANamp PCR 如DNA 结核MPB70／83抗体检测胶体金试纸，购自武汉科前动物生物制品有限责任公司华中农业大学微生 物国家重点实验室。 1．3样品的采集 300 ．20℃保存备 在兽防站同志的帮助下，采集奶牛的全血(采用ACD抗凝)，牛奶各100份， 用。采集奶牛血清146份，用于牛结核MPB70／83抗体检测胶体金试纸试验。 1．4引物的设计与合成 应用Primer 根据GeneBank发表的结核分枝杆菌复合物的插入序YUIS6110的基因序列， Premier5．0基因分析软件，其理论跨幅约317bp。引物序列如下： GCGAGCGTAGGCGTCGG．3’ 上游引物：5’．CCT GCCGCGTCCACGCCGCCA．3’ 下游引物：5’．TCA 引物的合成由上海捷瑞生物工程有限公司合成。 该文为贵州省科学技术基金项目《贵州奶牛结核病PCR技术检测的研究》，编号：黔科合J 字[2006]2040号。 吴位珩：(1966-)．，女(侗)，贵州人，副研究员，主要从事畜禽疾病研究工作。 1．5牛结核胶体金试验 牛结核MPB70／83抗