03DNA的限制性酶谱分析.pptVIP

实验三 ?DNA的限制性酶切分析 * * 一. 实验目的 通过本实验了解限制性内切酶的作用原理，限制性酶切技术及限制性酶切图谱的分析方法。 二. 实验原理 限制性内切酶是一类能识别并切割双链DNA分子中特定核苷酸序列的核酸内切酶。 限制性酶切反应体系的组成 1，DNA 2，缓冲液 提供限制性酶作用所需的离子浓度及种类；提供限制性酶作用所需的 pH值 3，限制性内切酶 限制性酶切图谱的分析 DNA在限制性酶切后往往会形成多条片段，从片段的数量和大小大致可以推断DNA限制性酶切位点的多少及相对位置。 我们往往利用DNA分子量Marker读出酶切片段的大小。 DNA分子量Marker 100 bp Marker 三. 实验方法 1．在0.5 ml 离心管中混和如下试剂： ? DNA： 4 μl 10×酶切缓冲液： 2 μl 无菌水： 13 μl HindIII： 1 μl 2．37℃水浴 45 min 3．取15μl反应液，1％琼脂糖凝胶电泳检测，同时以 ? DNA（EcoRI/HindIII）作为分子量Marker 4.记录实验结果：对照分子量Marker，记录所得片段的数量和大小，并分析? DNA有几个HindIII酶切位点