稀有鮈鲫血清中卵黄蛋白原检测方法研究.pdfVIP

第五届全国环境化学大会(2009) 稀有鮈鲫血清中卵黄蛋白原检测方法研究 骆文茹 周群芳 江桂斌* （中国科学院生态环境研究中心，环境化学与生态毒理学国家重点实验室，北京，100085； *联系人，E-mail ：gbjiang@rcees.ac.cn ） 稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）是我国特有的一种小型鲤科鱼类，其生理特征 与国际上推荐的斑马鱼、日本青鳉等模型动物有许多相似之处。已有研究表明， 与斑马鱼和日本青鳉相比，稀有鮈鲫对雌激素类化合物具有更高的敏感性。卵黄 蛋白原是一种理想的环境雌激素生物标志物，目前已被广泛应用于环境内分泌干 扰物研究领域中。在以稀有鮈鲫为实验动物进行相关研究时，需要定量检测鱼体 内产生的卵黄蛋白原（Vitellogenin ，Vtg ），进而对环境雌激素的生物效应进行评 价，因此建立该蛋白的检测方法是十分必要的。 本研究在纯化稀有鮈鲫卵黄蛋白原的基础上，制备了该蛋白的单克隆抗体， 得到了能够稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株，并制备了含有该单克隆抗体的小 鼠腹水。基于稀有鮈鲫卵黄蛋白原单克隆抗体，建立了间接竞争酶联免疫吸附方 法（ELISA ）定量检测稀有鮈鲫血清中的卵黄蛋白原。经过优化，最佳实验条件 如下：抗原包被浓度为 200ng/mL ，一抗和二抗的稀释度分别为 1:64000 和 1:10000。 在此条件下，方法的检测限为 2.6ng/mL ，线性范围为 3.9-2000ng/mL，回收率为 102.6%±22.8%，板内板间变异系数分别为 8.6%和 12.8%。通过Boltzmann 方程拟 合得到了方法的标准曲线，R2=0.9991 。本方法的检出限和线性范围与使用稀有鮈 鲫卵黄蛋白原多克隆抗体作为一抗的 ELISA 方法相当，但是能够克服采用多克隆 抗体进行检验的固有缺陷，如抗体特异性差、效价低、数量有限、动物间个体差 异大，难以重复制备等。因此，本方法具有更高的稳定性和更广泛的应用前景。 关键词：稀有鮈鲫 卵黄蛋白原 单克隆抗体 ELISA 作者简历 骆文茹，女，1981 年 9 月生，博士研究生，现就读于中国科学院生态环境研 究中心，研究方向为环境内分泌干扰物的生物效应。 401