RP-HPLC方法同时测定生物转化液中的香草醛和异丁香酚含量.pdfVIP

第28卷第5期 河南工业大学学报(自然科学版) V01．28。No．5 ofHenan of Science Oct．2007 2007年10月 Journal UniversityTechnology(NaturalEdition) 文章编号：1673-2383(2007)05--0050-03 RP．HPLC方法同时测定生物转化液中的香草醛 和异丁香酚含量 李永红1，王 瑞1，孙志浩2。 (1．郑州大学化学系，河南郑州450052；2．江南大学生物工程学院，江苏无锡214036) 摘要：建立了同时测定生物转化体系中香苹醛和异丁香酚含量的RP·HPLC方法．用Lichro— 100RP一18 spher C。。柱为固定相，甲醇和冰醋酸水溶液65：35(y)为流动相进行洗脱，检测波 长为270nm．香草醛和异丁香酚的线性范围分别为0—0．8g／L和0—1．0g／L；最低检测浓度 分剐为3．55 as／mL和0．015斗g／mL． 关键词：香草醛；异丁香酚；生物转化；RP—HPLC 中图分类号：TS201．2 文献标识码：B 0 前言 1 材料与方法 1．1仪器与试剂 香草醛(Vanillin)是食品工业中应用最广泛 Tech— 的香料之一，还可作为保鲜剂及医药等工业的原 HP一1100型高效液相色谱仪：Agilent 材料．香草醛目前主要由化学方法制备，但化学合 成制得的香草醛不是天然香料．天然香草醛可以 纯；香草醛及其他试剂均为分析纯． 从香子兰的花荚中提取，但这样得到的香草醛量 1．2色谱条件 少而价高．根据美国和欧盟的规定，合成香草醛在 100 mm× RP一18柱(250 色谱柱：Lichrospher 农产品和食品添加剂中的使用会引起法律方面的 4mm i．d．，5斗m)；流动相：甲醇一0．01％冰醋酸 争议…，再加上消费者的喜好。更促进了用生物 (体积比65：35)，流速lmL／min；紫外波长270 技术方法生产香草醛的研究．常用的生物技术方 nm，25℃检测；进样量25“L． 法有发酵法和酶转化法，发酵法生产香草醛多采 1．3样品和标样的制备 用阿魏酸作为前体物质，但天然阿魏酸价格较高， 标样的制备：精确称取香草醛0．500g、量取 而天然丁香酚价格低廉，因此用经丁香酚异构化 异丁香酚0．461mL，用甲醇溶解并定容至50mL， 所得异丁香酚为底物的酶转化法更有前途，建立 即为10g／L储备液，经适当稀释后配制单标用于 一种快速、准确、能同时分析底物和产物的分析方 定性；分别从各储备液中精确移取一定的量于10 法是酶转化法成功的前提．虽然有一些关于用 mL比色管中，定容后即配成一系列浓度的混标， HPLC【2-61方法测定香草醛的报道，但目前国内外 用于标准曲线、精密度及回收率等实验． 还未见用HPLC方法同时分析异丁香酚和香草醛 样品的制备：将转化液