荧光光谱法研究植物钙调素及其和拮抗剂的相互作用.pdfVIP

分析化学的成就与挑战 荧光光谱法研究植物钙调素及其与拮抗剂的相互作用‘ 刘德龙1 白娟：孙大业： (1河北师范大学化学系 2生物系石家庄050091) 关键词植物钙调素荧光光谱法钙调素拮抗剂 钙调素(CAM)是普遍存在于真核生物和原核生物中的一种主要Ca2+离子受体，它参与调 控多种生理反应过程及基因表达【11。CaM不仅存在于细胞内，也存在于细胞外(即细胞外CaM)。 研究结果表明，细胞外CaM具有多种生物学功能嘲。由于胞外CaM含量极低(约比胞内CaM 低两个数量级伽)，因此有关细胞外CaM的纯化及性质研究的报道极少。晟近，Nagai[3]等从细胞 培养介质中纯化出一种细胞外CaM，其分子质量约为10 植物中提纯了一种细胞外CaM，利用钙调素的内源荧光及稀土离子光谱研究了它的结构性质及 其与CaM拮抗剂相互作用。 1材料与方法参见文献H·”。 2结果与讨论 2．1细胞外CaM的内源荧光光谱疆敏化Tb’离子的激发；匕谱 可用Tb”离子与蛋白质结合后的激发光谱来判断T旷离子结合部位的芳香氪基酸种类。结果 III／1， 表明，细胞外CaM敏化Tb3+离子的激发光谱具有典型的Tyr光谱的特点，最大峰波长约278 子结合部位存在Tyr残基。而其内源荧光发射光谱也显示细胞外CaM分子中含有Tyr残基(k约 在307rim)。另外，此体系中的敏化Tb3+离子激发光谱及内源荧光的强度远低于同样浓度牛脑CaM 光谱的强度，这与植物CaM中只含有一个Tyr的结论是一致的。 2．2细胞外CaM中金属离子结合位点数的测定 本工作采用直接激发Tb”离子的方法测定细胞外CaM中金属离子的结合位点数。在Tb”离 子荧光强度与q‰比值的变化曲线中可见，随着体系中T旷离子浓度增加，荧光强度逐渐 增加，这是T旷离子离子与CaM中“EF”手结构配位后而取代了与1口+离子配位的水分子．因 而降低了非辐射速率并导致发光效率提高引起的，因为同样浓度的水合1口+离子荧光强度很小。 当q‘／c厶，=4时．前后两条直线有一明显转折点，说明细胞外CaM具有4个金属离子结合位 点。这与CaM的一般结构特点是一致的。 2．3细胞外CaM中Tyr—III，IV位距离的洲定 能量传递理论【6I，供体与受体之闻有如下的关系式： E=【1+(r，岛)6]_l (1) ·国家自然科学基金重点项目、河北省教委自然科学基金及河北省博士科研基金项目资助。 4ll 坌堑垡竺箜堕塾量垫些 ——一 碟=(8．78x10。25)足2·％-月。一J (2) ，；』F(V)-5(V)·V4·#v／(SF(V)·dr) (3) 当E十分低时(例如小于百分之几)，则E按下式计算【6】： ‰一24ba+。吼，“4y『‰+) (4) (4)式中，爿矿及A砷为受体付及供体Tyr的发射光镕}面积。本史中爿帝及一m由仪器自动 积分求得。P对于供体与受体均为各向异性时取为2／3，但在Ca／vl中由于Tyr发射偶极偏振日垂直 中驴11州々能效率十制氐(即Tyr荧光强度基本不受影响)．故按(4)斌斟{莩—E“。 m。这一数值与牛脑CaM中相 可得出珊一III位距离为1．104nIn．1n一Ⅳ位距离为1．056 应值为1．31nm和1．27nrn相比较小，可能与胞外CaM的分子质量较小有关嗍。 2．4Tb’+离子帮讹发光研究胞外CaM与拮抗剂w7的作用往点 CaM拮抗剂是探明CaM生理功能的重要工具。CaM敏化Tb”离子荧光光谱变化可用于研 究CaM与拮抗剂的作用位点。试验在Tb一离子胞外CaM溶液中加入不同浓度的CaM拮抗剂 w7后测定敏化附+离子荧光光谱的变化．可见随着w7的加入．敏化1rb一