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新型pH敏感相分离高分子的制备及其
在免疫分析中应用的研究‘
朱庆枝杨黄浩陈石挛东辉陈小兰许金钩
(厦门大学化学化工学院现代分析教育部重点实验室厦门361005)
关键词pH敏感高分子相分离荧光免疫分析
聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIP)温度敏感高分子以其独特的温度敏感性质已成功地应用于免疫分
柿”】。但是这类温度敏感相分离免疫分析的免疫反应温度必须控制在PNIP的相转变温度(31℃)
以下,这不可避免地会影响免疫反应速度。pH敏感高分子是另一类对环境敏感的智能型高分子,
在其相转变pH值附近发生沉淀与溶解的可逆性变化。目前,pH敏感高分子在免疫分析中的应
用并没有受到重视,到目前为止只有一篇报道心这主要是由于现有的pH敏感高分子的相转变
nH大都在oH=3左右,在该口H值下,免疫反应生成的抗原.抗体免疫复合物会受到不同程度的
破坏,从而限制了这类高分子在免疫分析中的应用。本文将N.异丙基丙烯酰胺与甲基丙烯酸
MAA),以其作为免疫反应载体,建立了乙肝表面抗原的pH敏感相分离荧光免疫分析系统。其
测定灵敏度基本和固相法相当,而免疫反应平衡时间只需4rain。
1 A.多抗偶联物的制各
pFl敏感高分子研f口_co.MA
pH敏感高分子的临界相转变pH对高分子是否能用于免疫分析非常重要。适台作为免疫分析
载体的pH敏感高分子的临界相转变pH应该尽可能接近中性且相变pH范围要尽可能小。在本
验结果表明,当初始反应NIP与MAA的摩尔比为35:1时,得到的pH敏感高分子的临界pH为
5.6,在该pH附近可咀发生沉淀与溶解的快速可逆性变化。当溶液pH低于5.6时(37℃),高
分子很快从溶液中沉淀出来,而当溶液pH大于6.1时.高分子则又很好地溶于水。以其作为免疫
3将免疫复合物分离,实现
分析载体,在口H=7.0时使免疫体系发生均相免疫反应,然后在pH=5
均相免疫反应和异相分离。从而建立既具有均相反应快速性、又有异相免疫分析高灵敏度的pH
敏感相分离免疫分析方法。
本实验利用N.羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯作为抗体与高分子的偶联试剂,根据共聚原理,将
抗体与pH敏感高分子共价偶联。实验结果表明。抗体与高分子偶联后并不会影响高分子的pH敏
感性质。抗体在高分子上的固定效率为60.5%。进一步研究了免疫球蛋白在pH敏感商分子上的非
特异性吸附情况。结果表明,抗体在水溶性pH敏感高分子上存在着一定的非特异性吸附.但这
种非特异性吸附作用很弱.远小于抗体对疏水性材料(如96.孔板)以及热敏高分子的非特异性
吸附。对于50 uL时,即可很好地消除抗体对高
ug/mL的抗体,当0.3%的BSA溶液的用量为30
分子的非特异性吸附。本文选用50 0.3%BSA溶液来消除抗体蛋白对pH敏高分子的非特异性
pL
吸附。
·教育部博士点基金和福建省自然科学基金资助项目。
分析化学的成就与挑战
2免疫反应动力学
在一定温度范围内,温度升高可有效地加快抗原与抗体的免疫反应速率,通常所采_L}j的免
疫反应温度为37℃。本实验的均相免疫反应可以在37℃进行,其平衡时间为4rain,远少于热
min。
敏相分离免疫方法所需的反应时间刚。本文选用37℃免疫反应5
3工作曲线及样品测定
以HBsAg作为分析模型,考察了该法用于免疫分析的可行性。在最佳免疫反应条件下,HBsAg
在0 000
ng/mL~lnedmL范围内与体系相对荧光强度呈良好的线性关系。利用上述方法对正常人
和乙肝病人血清中的FIBsAg进行了测定,并和酶联吸附免疫分析法进行了比较(表1),结果令
人满意。
表1人叫青中乙肝表面抗原含量的测定
ELISA…
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