乙型肝炎病毒(HBV)宫内传播碱基突变地研究.pdfVIP

A16乙型肝炎病毒(HBV)宫内传播碱基突变的研究 第一军医大学南方医院妇产科(510515)钟梅 武警广东总队医院妇产科(510507)郭培奋 HBV的宫内传播是HBV的一种重要传播方式。研究乙肝病毒的宫内传播对优生优育有重要意义。 本课题调查本地区的相应人群的流行病学资料，并在此基础上被探讨发生母婴传播的病毒变异情况，现 报告如下。 材料与方法 1．研究对象 0、1、6联合BHIG接种。 肝疫苗10ug 2．抽提血清HBV—DNA 清作模板参与PCR循环，能降低抽提过程中的污染。 3．扩增HBV—DNAS基因序列，nested—PCR法，设计外引物对如下： 外引物对YP．：nt2820—28415’ ACCATAll曰n℃10GAACAAGA3’ 5’TIAGGGTITAAATC,TATACCC3’ SlR：nt842—822 内引物对YS．：nt203—2215’ GCGGC㈣TIGA3’ 5’ GGGACTCAAGATGTIGTACAG3’ YS2：nt788—769 5’ CCqV．C3C．GTGGCTCCAGTICC3’ KSl：nt56—76 5’ ATC33L33GTrC,GTICTIL13’ SS2：nt427—447 伸3min。每份标本至少行2次PCR，结果一致者确认结果。 4．ELISA法检测HBV—M 试剂盒复查。严格按说明书操作，判断结果按说明书规定，SIN2．1判断HBsAg阳性。 5．PcR产物测序 HBV 克隆，再测序。 6．基因突变的分析 分析软件用DNA—SIg“ 7．判断标准 胎儿的标本如血、组织、则显然为官内感染。 ——97—— 8．统计方法 使用SPSS8．0统计软件，采用f检验，四格表确切概率法，计量资料用t检验。 结果 1．孕产妇及新生儿HBV感染状况 表1病例组孕产妇HBV—M及珊Ⅳ一DNA检测结果 实验室检测线以下水平。 学意义，P0．05。 2．基因变异的分析 全程接种后HBV的变化。 99．O％。未发生母婴宫内传播的HBV 异(第130号家庭HBV，见下图谱)外，与参照序列相似。 T茁翁嚣咒。吲 ～j～…～‘“ 20 430 CttCGTCAAbGGC／；042 ×∑2￡救。，。产妇b酸∞一。。。新生儿《b0吣。。。。月复查 图中序列倒向与质粒连接，互补序列为acgaaaactgca3’标准序列为acggaaactgem’595 及新生儿同标准株，婴儿6月复查时第587位GGA变为AGA。 前宫内传播给胎儿，并在婴儿体内持续复制；d,JL 免疫压力下突变。 一98— 讨论 1．本地区孕产妇HBV携带率与官内感染情况。 的一些研究有明显的差异，可能与采血时间不同、检测方法不同有关。唐时幸用不同的检测方法，宫内 酸杂交法，表明不同组织及检测方法调查宫内感染率的有着很大差异。较为客观的研究“宫内感染”的 动度低，则在胎儿、新生儿血清中检出率低，而胎肝核酸杂交方法检测阳性率高。 广州地区HBV感染高发，但妊娠期肝病发生率低，我们调查过程中无一例孕产妇作出过临床“妊 娠期肝病”的诊断。表明妊娠极少引起Asc病变活动，对新生儿影响亦较小，产儿的成活率取决于分娩 时其成熟度。 2．新生儿母婴传播的HBV特点 国内外对官内感染的HBV的特点研究得较少；做得较多的是婴儿经主、被动免疫后，仍然发生 基由G—A