甜菜碱对细胞在高渗透压下保护作用地研究.pdfVIP

甜菜碱对细胞在高渗透压下保护作用的研究 牵嶷，刘铭，辛艳，曹付安 (清华大学化学工程系，北京，100084) 摘要：奉文研究了甜莱碱甘杂交瘤细胞c50生长代谢的影响，证实在高渗连压下，甜菜碱时C50 细胞有走好的保护作用。并确定了适于C50细胞的最佳浓度为10mM．为消除补料培养后期渗透压 过高的问题提供了一种有效的解决方法． 关t词：甜莱碱杂变瘤细胞高渗透压 细胞对渗透压的增加相当敏感，有文献【。I表明：对大多数细胞而言，适宜的渗透压为260一 320mOsm／Kg．在高渗透压下，细胞活力受到影响，最大细胞密度、比生长速率等有不同程度下 以上；在455mOsm／kg下，细胞则根本无法存活。 在补料培养中，由于营养物质的加入和代谢副产物的积累，渗透压将成为进一步培养的限制 因素．这也是我们最终实现杂交瘤细胞的补料培养必须解决的问题。添加细胞保护剂不失为一条 有效的途径。文献报道口1p】．甜菜碱在高渗透压下对某些细胞株有一定的保护作用，但是否适用 于C50细胞．还需要具体的试验来确定。 1材料和方法 l-l细胞系、培养条件 本文所使用的是分泌IgG型抗CEA单抗的鼠．鼠杂交瘤细胞C50．由北京生物制品研究所提 为5％(天津川页)。试验在方瓶中进行，环境为37。C，5％c02。接种时，选择处于对数生长期 的细胞，离心弃上清，用新鲜的DMEM培养基悬浮后接种，每批2或3个平行样。其他成分预 先配成溶液，据需要加入．注意使加入体积小于体系总体积的5％。 1．2各组培养基组成 A组：标准的DMEM培养基作空白对照，渗透压为330mOsm／Kg。 B组：在DMEM培养基中加入10raM甜菜碱，研究甜菜碱对代谢的影响。 碱对细胞的保护作用． D组：其体系同于B组．但不加甜菜碱。 高到530mOsm／Kg，同时每瓶中再补2ml的5％血清的DMEM培养基。 I．3分析方法 葡萄糖利用葡萄糖氧化酶法(试剂盒)分析．乳酸、铵离子分别采用三氯化铁比色法和靛酚 Blue染色排除法。 蓝比色法分析．细胞计数用Trypan 2结果与讨论 2．1甜菜碱对细胞生长的影响 图l是ABCD四组试验的细胞生长曲线。从图中可以看出，甜菜碱的加入对细胞的生长几 乎没有影响，B组细胞的最大密度、达到最大密度所需的时间以及细胞对数生长期的曲线都和空 白对照A组一致，两者之间井无显著性差异。C组细胞的生长受到一定的抑制，生长速率降低， 活细胞的最大密度下降了20％，达最大密度的时闻滞后了约12小时，对数生长期曲线中间有一 个5--8小时的“平台”，这可能是细胞对环境的一个主动适应过程。D组细胞(即体系中增大 渗透压，但不加甜菜碱)受到严重的抑制，最大细胞密度只有参比体系的25％．这与我们前面讨 论 的高渗透压对细胞有害的结论相一致。 ￡ 搿 匠 V 越 帕 霎 图1甜菜碱对细胞生长的影响 图2显示了高渗透压下，甜菜碱对细胞物质代谢的影响情况。由图可见，体系中加A甜菜碱 以后．物质代谢曲线与参比体系物质代谢曲线几乎相同。从这一点上，我们可以近似地认为，体 系中加入甜菜碱对细胞的代谢不产生影响。这正是我们所需要的。 反之．如果体系中加入甜菜 碱后，虽然对细胞在高渗透压下起到了保护作用，而细胞自身的代谢却因此而发生了变化，则失 去了实验的原有意义了。 董 善 匿 互 图2高渗透压体系中物质代谢情况 2．2甜菜碱最佳浓度的研究 图3是不同甜菜碱浓度下细胞的生长曲线。从图中可以看到，F、G、H三组甜菜碱浓度下的 著的提高，其中．甜菜碱浓度为10mM的G组的最大细胞密度比对照提高了67％。在补加Nacl 之后，体系的渗透压达到了530mOsm／Kg，各组细胞仍能继续生长，说明在高渗透压条件下培养 了48小时之后，细胞已经适应了高渗环境。