仁术健胃颗粒的抗氧化作用的研究.pdfVIP

仁术健胃颗粒的抗氧化作用研究 王芳曹玉付招蚌王凯风韩锐 (中国医学科学院药物研究所北京100050 近年来随着癌症防治研究的进展，癌的化学预防作用逐渐成为该领域的研究热点之 一。化学预防是用化学药物阻断癌变的发生以及逆转癌前病变，以最终减少恶性肿瘤的 发生。药物可以通过其抗诱变作用、抗氧化作用而发挥其化学预防作用。胃癌是我国发 病率较高的肿瘤之一，近年来随着胃镜等检测手段的出现，胃癌的化学预防研究成为一个 重要的研究方向。近年来国内开展了中医药治疗胃黏膜癌前病变的研究，特别是利用现 代实验手段，从化学预防角度阐明中医药逆转癌前病变，预防胃癌的作用机制，对于预防 胃癌，降低胃癌的发病率具有重要的意义。本文首次通过化学发光法[1，21以及单细胞凝 胶电泳法L3J观察了中药仁术健胃颗粒(以下简称仁术)对羟自由基引起的DNA损伤的影 响，利用比色法观察了它对巴豆油刺激大鼠多形核白细胞(PMNs)释放过氧化氢【4j的影 响，从而对仁术的抗氧化作用进行了初步评价，为其进一步开发为一种新型的癌化学预防 药提供了一定的理论基础。 1材 料 动物：健康成年大鼠，雄性，体重300～3509，由中国医学科学院实验动物中心提供。 细胞：中国仓鼠肺细胞(CHL)本实验室自行传代保存。 药品及试剂：仁术，江苏省中医院提供；胃复春片，杭州胡庆余堂制药厂产品；硫酸铜 (o-s04·5H20)：北京五七六零一化工厂产品；邻啡罗啉(Phen)：北京芳草医药华工研制 公司产品；维生素c(vc)：上海化学试剂公司产品；30％过氧化氢(H202)：北京化工厂产 品；DNA：SigIIla产品。琼脂糖：Sp“sh产品(北京鼎国生物发展中心分装)；低熔点琼脂 糖：Sigrm产品(北京百泰生化技术公司分装)；溴化乙啶(EB)：sigma产品；巴豆油：江苏 南通制药厂；右旋糖苷，相对分子质量10万，北京化工厂产品；辣根过氧化物酶： 删ngerMannheim产品；酚红：上海化学试剂采购供应站。 仪器：Ⅲ)cL广3型微弱化学发光测量仪：REv00二氧化碳培养箱；IM型倒置显微镜； 水平琼脂糖凝胶电泳仪；citi∞nSe。哪眦分光光度计。 2方 法 2．1利用化学发光法研究仁术对H202引起DNA损伤的作用 rnl 取1 液)放人发光仪样品池中，加入IOpI -32I· 浓度，胃复春12．5膳／TTll浓度溶液各10“，对照组用缓冲液补足体积。放置1T11in后加入 (5×10 5mⅡ几)，Phen(3．5×10—4 rn01／L)，vc(3×10一4 m丑／L)，H2。2(0．5％)，DNA (10旭／m1)组成。 2．2单细胞凝胶电泳法研究仁术对H202引起DNA损伤的作用 将CHL细胞传代培养于含10％小牛血清(含100旭／“青霉素、100旭向d链霉素)的 后加入受试药物。设仁术12．5、25．0、50．0耀删三浓度，胃复春12．0耀／nd作为阳性对 照。继续培养48h，至细胞生长近饱和。在每瓶细胞中加入终浓度为5吣n01几的H2Q 作用5rnjn，P卫ls冲洗后刮下细胞冲匀，将50pI细胞液与预温的1％低熔点琼脂糖150pl混 0．03rrl01／ 匀，取90出做顶层涂于1％琼脂糖铺成的底层上固定。将胶片置溶解液(N幻H l，Naa lmol／1)1h，解旋液(NaOH lmDl／1)中10lTlin，65v条件下电 0．3mol几Na2EDTA 泳15Tnin(电泳液组成：Tris40mm01／1，Ⅱ丌A 5mrnol几乙酸20Ⅱ砌／1，pH8．3)。用EB 溶液(25耀％)染色10m．m，荧光显微镜下观察并照相。 2．3 比色法测定仁术对巴豆油刺激大鼠多形核白细胞(PMNs)释放H202的 影响