畜禽血红蛋白抗氧化肽的制备工艺研究.docVIP

理学院第四届 “创新杯”科技学术 论文大赛 作品名称：畜禽血红蛋白抗氧化肽的制备工艺研究 作品类别：自然科学 院 系： 理学院 专业班级： 生物技术09-1 作 者： 刘晓丹 指导教师： 刘莹 联系方式： 畜禽血红蛋白抗氧化肽的制备工艺研究 刘晓丹，周伟，王伟成，陈尧杰 摘要：以畜禽血为原料，用酶解法制备抗氧化肽，并研究[E]/[S]、时间、温度和pH值对实验的影响，实验结果表明鸡血红蛋白抗氧化肽制备的最佳工艺条件为用胃蛋白酶在[E]/[S]为4%、时间3 h、温度37℃、pH 值为1.5条件下制备的鸡血蛋白抗氧化肽的还原力最强为0.902。 关键词：畜禽血；酶解法；抗氧化肽 血液经过离心可以分离成血浆和细胞两个部分:血浆约占总量的65%,含8%的蛋白质,用离子交换层析可将其分为三种主要成分,纤维蛋白,各种球蛋白和白蛋白;剩余的约35%的细胞成份主要是红细胞浓缩物,含有36%的蛋白质,主要是血红蛋白。本文主要探索一种实用、高效的畜禽血红蛋白抗氧化肽的制备方法，以提高畜禽血液副产品，并为后续实验研究奠定基础。 1 材料与方法 1.1 主要材料：新鲜畜禽血液（鸭血与鸡血为主要成分），购于花园菜市场；胰蛋白酶；胃蛋白酶；中性蛋白酶；其他试剂均为国产分析纯。 1.2主要仪器：HH- 4 型数显恒温水浴锅；TDL- 5 型台式离心机； B 型玻璃仪器气流烘干器；Phs- 3C 型精密pH 计；7230G 型可见分光光度计。 1.3实验方法 1.3.1 畜禽血红蛋白的提取新鲜鸡血→抗凝（柠檬酸三钠） →纱布过滤除杂→4 ℃冷冻离心（3 500 r/min，15 min）→ 弃上清→破胞（加3 倍体积蒸馏水充分搅拌）→冻融（4 ℃， 4 h） →4 ℃冷冻离心（3 500r/min，10 min） →上清液（鸡血红蛋白溶液）。 1.3.2血红蛋白含量的测定采用考马斯亮蓝法。 1.3.3 畜禽血红蛋白抗氧化肽的制备血红蛋白（0.10 g/mL）→热变性处理（90℃，20 min） →冷却→调pH 值→酶水解→灭酶（沸水浴10 min） →离心（4 800 r/min，15 min） →取上清→鸡血红蛋白抗氧化肽。 1.3.4 试验设计 正交试验：胃蛋白酶 L9(34) 列号 试验号 PH 温度（℃） [E]/[S]（%） 时间(h) 1 1.5 30 1 2 2 1.5 37 4 4 3 1.5 44 7 6 4 2 30 4 6 5 2 37 7 2 6 2 44 1 4 7 2.5 30 7 4 8 2.5 37 1 6 9 2.5 44 4 2 正交试验：胰蛋白酶 L9(34) 列号 试验号 PH 温度（℃） [E]/[S] （%） 时间(h) 1 6 30 1 2 2 6 37 4 4 3 6 44 7 6 4 7 30 4 6 5 7 37 7 2 6 7 44 1 4 7 8 30 7 4 8 8 37 1 6 9 8 44 4 2 正交试验：中性蛋白酶 L9(34) 列号 试验号 PH 温度（℃） [E]/[S]（%） 时间（h） 1 8.5 45 1 2 2 8.5 50 4 4 3 8.5 55 7 6 4 9.0 45 4 6 5 9.0 50 7 2 6 9.0 55 1 4 7 9.5 45 7 4 8 9.5 50 1 6 9 9.5 55 4 2 1.3.5 鸡血红蛋白抗氧化肽还原力的测定 Yen和Siddhuraju P[1]等人研究表明，抗氧化剂的还原力与其抗氧化性之间存在联系。抗氧化剂是通过自身的还原作用给出电子而清除自由基的，还原力越强，抗氧化性越强。因此，可通过测定还原力来说明抗氧化活性的强弱。在15 mL 试管中分别加入1 mL 样品、2.5 mL磷酸盐缓冲溶液（0.2 mol/L、pH 值为6.6） 和5 mL1% 铁氰化钾，置于50 ℃水浴中反应20 min，然后加入10%的三氯乙酸5 mL，摇匀。吸取上清液2.5 mL，加入2.5 mL 蒸馏水和0.5 mL 0.1%的三氯化铁溶液，测定样品在700 nm 处的吸光度值，吸光值越大表明还原力越强[2]。 2 结果与分析 2.1 3种蛋白酶制备的畜禽血红蛋白抗氧化肽的还原力 不同的蛋白酶，由于其水解蛋白质时，作用的位点不同，对蛋白质的水解度不同，制备出来的抗氧化肽的抗氧化活性也会有较大差异。3 种不同蛋白酶所制备的鸡血红蛋白抗氧化肽的综合还原力见