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生物制品学2-9章部分重点.doc
第二章 生物技术与生物制品学的新进展
第一节 世界总的特点
一、基础研究不断深入
1、新基因的克隆和基因表达调控的研究全面展开;
2、以DNA、RNA和蛋白质为轴心的分子生物学理论和技术两大体系已基本完成。
3、DNA转化和测序也得到应用,开创了生物科学的一个新时代,使生物各学科都进入了分子生物学时代。
4、利用生物技术能有效地研制出对付各种“不治之症”的新药,因而它正吸引和激励着越来越多的科学家进行医药生物技术的基础和应用研究。
5、人类基因组的研究目标,就是要定位所有的基因和测定它们的核苷酸序列。
二、新产品不断出现
1、生物技术药物的品种不断增多,包括基因工程 疫苗、细胞因子等。
2、研制了新一代生物技术药物与生物制品,并更新了应用方法。
3、生物技术药物和生物制品的生产方法取得了进展.
4、利用基因工程技术构建新型多价活疫苗,是生物技术的又一个新进展。
三、新技术、新试剂不断出现
1、产生了两种医疗技术:细胞移植和基因治疗
2、生物试剂的开发。
(1)单抗的主要优点
1)高度同质性:单抗是由源于一个B淋巴细胞的单克隆杂交瘤细胞系所分泌的,因此抗体分子是同质的,即完全一样的;而多抗是由多种异质抗体分子组成的;
2)高度特异性:单抗是针对一个抗原决定簇的;
3)无限量供应性:分泌特异单抗的杂交瘤细胞系一旦建立,即可在液氮中长期保存,并可根据需要随时生产理化特性和免疫生物学特性明确的单抗试剂。同一种单抗不同批次的差异很小,便于标准化。
(2)单抗的交叉反应
特异性强是单抗的特性,但有时单抗可与相关或不相关的抗原发生交叉反应。
因为单抗所识别的是抗原分子上的单个抗原决定簇,其他相关或不相关的抗原分子上有相同或相似的抗原决定簇就可发生交叉反应。如有些鸡马立克氏病病毒单抗可以与伪狂犬病病毒发生交叉反应。
筛选没有交叉反应的单抗,如在制备新城疫病毒单抗时,首先要去掉与其他副粘病毒发生交叉反应的单抗。因为新城疫病毒有些抗原决定簇是与其他副粘病毒共有的。
利用交叉反应的特性,如筛选沙门氏菌的属特异单抗。
3、荧光抗体法(fluorescene Ab)、化学发光免疫检测技术(immunity detection)、DNA探针(probe)和聚合酶链式反应(PCR)等先进分子生物学检测技术的建立,大提高了诊断方法的敏感性和特异性,促进了诊断试剂的发展。
四、新型生物反应器(Bioreactor)和新分离技术(New isolation)不断出现
各种反应器的应用原则一般是:
1)进行悬浮培养,可用气升式、搅拌式、中空纤维管及陶质矩式通道蜂窝状生物反应器;
2)进行贴壁培养,可用搅拌式(微载体系统)、中空纤维管及陶质矩式通道蜂窝状生物反应器;
3)进行包埋培养,可用流化床、固定床生物反应器。针对各种生物反应器,还开发出了相应的控制装置和技术。
第三章 生物制品的制备
原料的选择原则:①有效成分含量高,新鲜;②原料来源丰富,产地较近;③原料中杂质含量少;④原料成本低等。
原料的选择注意事项:①植物原料生长的季节性;②微生物原料的对数期;③动物原料的年龄与性别。
原料的预处理与保存:
①动物原料:采集后要立即处理,去除结缔组织、脂肪组织等,并迅速冷冻贮存。
②植物原料:要择时采集并就地去除不用的部分,保鲜处理;
③微生物原料:要及时将菌细胞与培养液分开,进行保鲜处理。
原料的保存方法主要有:①冷冻法②有机溶剂脱水法③防腐剂保鲜
常用的破碎方法: ①磨切法②压力法③反复冻融法④超声波振荡破碎法⑤自溶法或酶解法
提取注意事项:①选择提取试剂。②考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。③注意提取的温度、pH、变性剂等因素。
分离纯化技术应满足的要求:
① 技术条件要温和,能保持目的产物的生物活性;② 选择性要好,能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来,达到较高纯化倍数;③ 收率要高;④ 两个技术之间要能直接衔接,不需要对物料加以处理或调整;⑤ 分离纯化过程要快,能够满足高生产率的需求。
分离纯化主要依赖色谱分离方法。色谱技术是下游精制阶段的常用手段,该法优点是具有多种多样的分离机制,设备简单,便于自动化控制和分离过程中无发热等有害效应。
蛋白质类制品的分离纯化方法:
(1)沉淀法:原理是使蛋白质胶体颗粒破坏,从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、与靶物质结合沉淀法(如抗体—抗原)等。
(2)按分子大小分离的方法:有超滤法和透折法(即膜分离方法)、凝胶层析法、超速离心法等。其中膜分离法可用于生物大分子物质的浓缩、分级和脱盐。
(3)按分子所带电荷进行分离的方法:离子交换柱层析法、电泳法、等电聚焦法等。
(4)亲和层析法
核酸类药物生产方法:主要有提取法和
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