间甲酚紫-DNA体系共振光散射地研究.pdfVIP

F2_09 间甲酚紫一DNA体系共振光散射的研究 王粤博吴霞’杨景和栾玉霞孙姝娜 山东大学胶体与界面化学教育部重点试验室，化学与化工学院，济南，250100 近年来，共振光散射(ResonanceLi【ghtScattering，RLS)技术已成为一项用来测定和研究生 物大分子高灵敏的新技术，它通过使用常规的荧光分光光度计测量共振光散射强度．自Huang 等n2】将此技术应用于核酸的定量以来，共振光散射法成为继分光光度法【3】，荧光法I‘3之后，又 一新的高灵敏度的核酸测定方法。目前，利用增强有机染料共振光散射测定核酸的报道有：藏 红T【q，亚甲基蓝161．亮绿n等．本文利用共振光散射技术研究了问甲酚紫与DNA作用。在PH=4．5 时．在阳离子表面活性剂CPB的存在下，随DNA浓度的增加，间甲酚紫的Imj增强，基于上述 现象建立了在CPB存在下，以CP为探针的测定DNA的新方法。 1实验部分 1．1化学试剂与仪器 鲱鱼精子DNA(fsDNA)(1．OOXl0。g·mL。)，间甲酚紫(c mol·L-‘)．以上试剂皆为分析纯， 缓冲溶液(pH值为4．5)，十六烷基三甲基吡啶(CPB，1×104 实验用水为三次蒸馏水。 日立850型荧光分光光度计(Shimadzu)，pHS．2型酸度计(上海雷磁仪器厂)。 1．2实验方法 在25 溶液，用蒸馏水定容至10 射强度)。 2．结果与讨论 2．1共振光散射光谱 CP-CPB在550nm，620rim处有弱的散射。DNA的加入使550nm处的共振光散射强度大大 增加．故实验中选择550nm为测量波长． 2．2影响体系共振光散射的因素． (1)pH的影响． 在PH=3．5·5．2范围内，体系的共振光散射增强显著，pH为4．5时，体系的共振光散射强度 mL 有最大增强，且以加入2 HMTA．HCl(O．21％，W／V)的效果最佳。 (2)cp浓度的影响 增强最大。 (3)表面活性剂影响 试验了不同表面活性剂的影响，发现选择CPB对散射强度有最大增强且CPB浓度为7×10-4 mol·L“时，体系的共振光散射强度增强最大。 (4)试剂加入顺序的影响 染料CP-DNA．缓冲溶液．CPB的加入顺序为最好。 (5)稳定性实验 论文联系人：监ux：岔翊u．妇u。￡Ⅱ．Tel：0531-8364918 牟项H由圆采自然科学咎仓‘I高等学校章点实验室访旧学#捧仓资助 155 15分钟达到最大，且2小时内保持不变· 按顺序加入试剂，AIRLs (6)共存物质的干扰 一 10eg·mL1，对多种氨基酸，蛋白质和阳 在最佳实验条件下，固定fsDNA的浓度为5X 离子等进行了干扰实验。发现A1”，M矿，HSA，BSA有较大干扰， 3．工作曲线 在最佳实验条件下．以△IRLs对fsDNA的浓度作工作曲线，DNA的线性范围为0．1-20 ug·mL-t．相关系数为O．9972，检出限为1X1049·mL～， 关键词：共振光散射，问甲酚紫，DNA，溴代十六烷基吡啶 参考文献 1．CZHuang，KALi andSYTong．Anal．Chem．，1996，68(3)：2259 and Li 2．CZHuang，KA SYTong．Anal．Chem．，1997，69(3)：514 L andA 3．KGiles Myers．Nature，1965，4979：93 4．YXCi，YZLi andWBChang．Anal．Chim．Acta．，1991，248：589 FLiandXDLiu．Anal．Chim．Acta．，1998，375：89 5．CZHuang，Y XIANGet al(向海艳等)．Chinese