检测大肠癌抗原的脂质体免疫分析法的研究.pdfVIP

分析化学的成就与挑战 检测大肠癌抗原的脂质体免疫分析法研究+ 扬宇-常文保-慈云祥t郭撮泉z (。北京大学化学与分子工程学院2北京大学生命科学中心北京100871) 关键词大肠癌抗原脂质体免疫分析 大嘞密是世界卫生组织所列全球十大常见肿瘤之一，作为发病率上升的癌种，目前己成为 威胁我国人民健康的元凶之一．所以大肠癌的诊断与治疗的研究日益引起重视。目前．肠癌的诊 断主要靠组织切片“活检”的方法，该法虽然可靠，但病人不愿接受，且有一定的危险性。因 此本文拟建立一种快速、灵敏的检测大肠癌抗原的脂质体免疫分析法(Liposome Immunoassay, LIA)II。Zl。脂晴唪作为生物模拟膜，在形成过程中可以包裹大量的标记物分子，具有信号放大作 用。我们将内部包有羧基荧光素(cF)的脂质体与大肠癌的单克隆抗体偶联．制成了免疫脂质 体。该免疫船质体与血清样品中的大肠癌抗原结合形成的免疫结合物，可以激活补体，从而导致 腊质体的特异性溶解，释放出其中的标记物．J比标记物含量与待测的抗原量成正比，以荧光法测 定荧光素的含量即可求得大肠癌抗原的多少。这种以血清为样品的分析方法，病人易接受，操作 也不困难．故有很好的临床应用前景。 1实验部分 1．1仪器与试剂PE LS-50B荧光分光光度计．DO-2022A酶联免疫检测仪；大肠癌抗原及 其单克隆抗体，补体采自豚鼠心脏及颈动脉新鲜的血液，经蔼酊“取t清液得到。 1．2实验方法采用反相蒸发法p】台成包裹羧基荧光素(cF)的脂质体，然后与巯基化闱的 单抗偶联，得到用于检测大肠癌的免疫脂质体。采用补体介导的脂质体免疫分析法(L1A)测定 大肠癌抗原方法中，补体的最佳稀释度为1000倍稀释．此时脂质体的释放量最大，而补体与免 疫脂质体温育2h，脂质体的破膜效果显著。在此基础E，于小发光管中，依次加入倍比稀释的 大肠癌抗原、过量的免疫脂质体及1000倍稀释的新制的补体．免疫反应发生。终止反应后，测 rim／517 rim)。免疫反应的结果以特异性释放率表示： 定溶液的荧光强度(k^k=492 F—F 标记物的特异性释放率=100x皇—告 竹一to 其中：E为免疫溶解反应后体系的荧光强度；只为标记物的的自然释放值：B为标记物完 全释放值。特异性释放率反映的是脂质体的特异性溶解。实验表明，在1．2 ng／mL范 pgtmL～23 围内，标记物的特异性释放率与大肠癌抗原的浓度对数存在着线性关系。相应地．用ELISA法 测定大肠癌抗原的工作曲线的线性范围为100 pg／mL～200 n咖L。Ln法同ELISA法相比，灵 敏度提高了2个数量级。 2结果与讨论 利用均相Ln法测定了病人血清中的癌相关抗原的含量，并将结果与正常人血清进行了对 照。从表l中结果可知，】5例太肠癌病人血清中的癌相关抗原的含量比正常人的高8倍。由此 判断某人是否患大肠癌。进一步优化测定条件．均相LIA法测定大肠癌相关抗原有望用于I临床。 ’国家自然科学基金资助课题． ——一坌堑垡兰塑堕塾生垫皇 表1均相LIA法测定—ⅦⅡ清中的癌相关抗原结果表 至!!△ ．一一 16．5 燃壹△一——一 21．8 18,9． 22．6 17．1