反相胶束介质中漆酶催化反应中间体地研究.pdfVIP

分析化学的成就与挑战 反相胶束介质中漆酶催化反应中间体的研究 刘志宏蔡汝秀 (武汉大学化学与环境科学学院湖北430072) 关键词反相胶柬漆酶中间体 酶催化反应中间体的研究是人们感兴趣的课题，对于揭示酶催反应历程具有重要价值。近 年来酶催化反应中间体己成为生物医学和分析化学领域的重要研究对象n许多重要的生命现象 都与之相关。中间体的形态多种多样，包括自由基、配合物或其它瞬态中间分子等，其中半醌类 自由基是人们研究的重要对象[21．许多疾病与之相关，而一些抗氧化物种如维生素E的抗氧化作 用也与半醌自由基的活性有关。人们建立了一系列酶反应体系．对半醌自由基体外模拟作了一些 研究，如黄嘌呤氧化酶-黄嘌呤体系口J、漆酶旬，体系H’等。但是作为一种生物活性物质，半配自 由基中间体的寿命短，捕捉信号困难．无法在静止状态下研究其性质；或者需要合成具有特殊结 构特征的复杂底物并利用萃取等分离手段来获取一定“稳态”浓度的中间体，比较繁琐。依据 反相胶束所具有的增稳增溶等特殊性质，我们试验发现，漆酶(1acxase),-％-邻苯二胺(OPDA)体系 在反相胶粜中进行反应时，中间体的吸收信号十分清晰，强度很高且可稳定数十分钟。这使得静 止状态下直接用光谱学手段研究半醌自由基中间体的行为成为可能。 1实验方法 OPDA用前经升华处理除尽水分．配置0．2moLL溶液，因其较易氧化宜现配现用：双『2．乙 基己基】．磺酸基琥珀酸钠(AerosolOT,AOT)先经如吼干燥，溶于经无水硫酸钙干燥及蒸馏处 理除水的正辛烷(n-octane)得0．1mol／L溶液。将一定体积的底物和漆酶溶液分别加入两只装有 配成反相胶柬溶液：置于叵温槽内预热，测定时迅速混合。在UVKON-941快速扫描紫外-可见分 nm～800 rim 光光谱仪上，于330 nrtl范围内每2mln扫描其吸收光谱。动力学参数测定时记录376 处中间体的爿～，曲线。 2结果与讨论 2．1反相胶木介质对中间体信号的增稳及增强作用 在相同的实验条件下．记录此漆酶．02-邻苯二胺体系在反相胶束和水溶液中的时间．波长．吸 nm处有一先生成后衰减的特征中间 收值二维数据图1(略)。从圈中可明显看到，反相胶束中376 体信号，且稳定存在较长时间，而在水溶液中．中间体的存在从谱图上根本观察不到。用主成分 分析研究两种矩阵数据，发现反相胶柬中的主因子数确实比水溶液中大1。表明了反相胶束对稍 纵即逝的中间体信息的增强和稳定能力。 2．2中间体生成和衰减的动力学参数 用基于偏最小二乘的误差补偿算法嗍直接模拟376m的一～f数据，研究了中间体生成和衰 减过程的动力学参数。发现中间体的生成为一级，衰减为二级反应。与文献Ⅲ的结果一致。并研 究了不同pH和∥值条件下∞争喊与衰减的速率常数蜀，岛。结果表明，只有在一定的pH和 矿值范围内体系出现明显^J中nq体峰形，实因此时速率常数蜀，局满足一定的相对大小关系从 ． 坌堑堡兰竺些塾皇垫堕 而中间体自由基的浓度得以积累。 2．3中阃体薏酶反应的直接产物 捕捉到的中间体，究竟是酶反应的产物，印半醒自由基，还是仅仅为酶．底物配合物或其它形 式的瞬态结构?实验记录了不同底物浓度下中间体的动力学曲线，计算出各自的初始反应速率圪。 r=O．99J9 7。这表明中闻体的生成满足酶催化动力学“米．门”方程，是酶反应的产物。 参考文献 1 J0}嘲I J砭蚤№曲waD艮Bioch讲LL，1993，32(31)：8004 2 吴兴国．慕汝秀，黄厚平，王扁．高等学校化孝学报．1998，19(8)：佗23 3 Sch一曲工Mo旺时CS妯aBK吐a1．J．Am．ch咖．S嘛。1987,109(2)：348 4 59 王光辉，江涛．武汉大学学报(自然科学版)，1994，(t 5 CalRuxiu,WuXinggao，Liu动m∞g．MaWanhmgA