克隆木糖还原酶XYL1基因的工程菌YT发酵玉米芯水解液地研究.pdfVIP

研究报告 C30 克隆木糖还原酶X儿7基因的 工程菌YT发酵玉米芯水解液的研究 许凯扬杨涛李国民 (长沙理工大学化学与生物工程学院，长沙410004) 摘要克隆毕赤氏酵母(Pichia cerevisiae 6508。利用 体pYMIKP中．构建得到表达质粒pYMIKP—XYLl，转化酿酒酵母工业菌株Saccharomyces G418筛选转化子，得到含高拷贝木糖还原酶基因的酿酒酵母重组菌YT，以YT发酵玉米芯工业水解液生产木糖醇． 研究其发酵特性和规律．为工业上生物转化法生产木糖醇提供参考。 关键词 木糖还原酶 工程茵 发酵 玉米芯水解液 8．537 木糖醇是一种甜味剂。甜度相当于蔗糖，发热量 葡萄糖27．955gm、阿拉伯糖1 gm、甘露糖4．326g／ L、甘油5．387 相当于葡萄糖。在人体中代谢不需要胰岛素。而且还 gm、乙酸0．274叽、乙醇0．066gm、糠 可以防龋齿。广泛应用于医药、食品、化工行业中”1。 木糖醇的生产大多采用化学法．该法分离纯化困难、成 pH值为2．5～3．0。 本高，污染较严重。因此许多学者对微生物发酵生产 1．1．2菌株和质粒 木糖醇进行了广泛研究。大部分采用假丝酵母{Candida sp．)。如方祥年等胆】、孙昆山等先后利用假丝酵母发酵 以二倍体酒精生产工业菌株酿酒酵母 玉米芯半纤维素水解液取得较好的效果，但假丝酵母 (Saccharomyces 具有一定的毒性：也有采用基因工程菌，如J．Zaldivar 等口1将木糖还原酶基因(XYLl)导入酿酒酵母。这种粒Pymikp【51为本实验室构建的多拷贝整合质粒．用于 代谢工程菌株可将95％以上的木糖转化为木糖醇。但 外源基因在工业菌株的整合表达。 发酵培养基为实验室合成培养基．而且只能在消耗完 己糖之后才吸收和转化木糖，木糖生成速率很低。本 1．1．3培养基 实验室构建的工程菌株YT能共代谢葡萄糖和木糖．并 1．1，3．1 斜面菌种培养基(YEPD培养基)蛋白 发酵玉米芯工业水解液得到了较好的发酵效果。 胨2％．葡萄糖2％．酵母粉1％，琼脂1．5％。 1．1．3．2液体种子培养基(YPD培养基)蛋白胨 1材料与方法 2％，葡萄糖2％．酵母粉1％，pH值为6．0。 1．1．33玉米芯工业水解液培养基50mL玉米芯 1．1材料 工业水解液，2％(NH4)2S04，pH值为5．0。 1．1．1玉米芯水解液原料 由山东龙力生物科技有限公司提供．经本实验室 1．2方法 gm、 1．2．1菌种培养与发酵 HPLC分析，该水解液中主要糖类成分为木糖238．525 液体种子培养：斜面菌种一环．接入液体种子培 mL三角瓶装液量50mL，于30℃、摇床 养基中，250 第一作者简介．许凯扬，男，博士，副教授，主要从事生物资源开发利用、新能源 方面的研究。