中华大蟾蜍受精过程细胞学研究.pdfVIP

中华大蟾蜍受精过程的细胞学研究 朱海燕 苏秀芳 (兰州市三十三中学．兰州730000) (兰州市第二中学，兰州730000) 梁桂霞’ (西北师太生物系，兰州730070) 摘要采用石蜡切片的方法，对中华大蟾蜍成熟卵及受精后发育不同时期的受精卵进行了细胞 学韵检查及分析．结果表明t中华大蟾蜍或熟卵处于第二收成熟分裂中期l受精后20分钟，精子 进入卵内；40～60分钟，雄雌原棱先后形成l80～100分钟，雌雄原核相互移近}120～140分钟， 两原核相互靠近结合形成合子棱{160分钟首次卵裂中期图形建成。 关键调受精卵原棱台子核中华大蟾蛛 中华大培蜍在无尾两栖类中，有其个体较大，分布较广，好采集、易贮藏等优点。因此 长期以来以中华大蟾蜍为材料，进行发育、繁殖及生理生化方面的研究工作报道很多，其中 朱洗等对中华大蟾蜍卵母细胞的体外成熟及单性生殖方面有深入的研究i(朱洗，1958， 1959)毛铭廷等对中华大蟾蜍的人工催产人工受精及其早期发育方面进行了细致的研究(毛 铭廷，1964)。本文以中华大蟾蜍为材料，对其受精盾发育不同时期的受精卵进行丁细胞学检 查。现将研究结果报道如下，目的在于，为进一步研究动物的受精机理及早期发育中的核质 关系等方面的问题提供依据和资料。 1材料和方法 实验用的中华大蟾蜍∞6t‘加购自西安市郊，干入冬前放入4～10℃左右的地窑内贮 存，冷藏2～3个月后即可使用。经冬眠后的亲体在室温18～20℃下，通过人工催产人工授精 获得成熟未受精卵及不同发育时期的受精卵。以人工授精的时间为标准，计算受精时间，取 材以每间隔20分钟的时差，从未受精卵起至受精后180分钟止，共10组，每组12～24粒卵， 以巴德荣(Bataillon)固定剂固定。石蜡包埋，连续切片，片厚8“m，用番红、亮绿染色，DPx 封片剂封片，Olympus显微镜下检查并拍照。 2实验结果 未受精卵，卵细胞核位于动物极皮层浅部，呈第二次成熟分裂中期象，在出现图象的近 旁，卵外极窝内有刚刚排出的第一极体(图版xxxI：1)；此时卵表较光滑．有一层较厚的色 素颗粒，卵黄膜虽已离开卵质膜，但二者之间没有明显的排泄物。 受精20分钟，精子刚刚进入卵内，有的仍在皮层浅部(图版xxxI：2)；此时的卵核进 ·联系人 875 入第2次成熟分裂后期，染色体拉向两极。 受精40分钟，精子入卵后向卵质深部移动．于此同时，核膜崩解消失．核内染色质变成 丝状，着色淡绿，呈嗜酸性反应，新的核膜尚未形成(图版xxxⅡ：3)；卵核已排出第二极体， 留于卵内的一半染色体开始膨松呈囊泡状。 受精60分钟，雄原核已完全形成．并移至卵子动物极的中央，此处有一个较大的清亮区。 核位于清亮区的一旁(图版×xxⅡ：4)；此时的雌原核已具雏形，呈圆形的泡状．内含着色淡 绿的丝状物，核周围被卵黄颗粒包围，核膜外面有色素颗粒附着(图版xxxⅡ：5)，向卵质深 部，雌雄原核所在地移动。 受精80分钟，雌雄原核相互移迁，有的雌原核已进入雄核所在的清亮区内，此时的雄原 核已离开清亮区的边缘，向清亮区的中央移动，并向雌核靠近(图版xxxI：6)。 受精100分钟，两性原核进一步靠近拼拢。 受精120分钟，两原核的界线消失，核膜凹凸不平，呈囊泡状(图版xxxI：7)。 受精140分钟，两原核完全融合成一个合子核，呈椭圆形，内含着色淡红的染色质丝。 受精160分钟，合子核完全形成，有的已进入首次卵裂中期，合子核的核膜消失，核两 端的中心粒及星光十分发达，被亮绿染成深绿色，核内染色体着色大红，排列在纺锤体的中 腰赤道板上(图版xxxI：8)。 3结论与讨论 本实验结果显示，中华大蟾蜍的受精过程从精卵接台到卵内首次卵裂中期图形的建成，在 18～20℃下，共经历了160分钟。此结果与颉东旭(1992)曾报道的中华大蟾蜍受精卵的细 胞学研究结果在时间上相差40分钟。造成这种差异的原因，我们认为主要与实验的温度有直 接的关系，但在颖东旭的报道中未表明受精卵发育的温度范围，因而很难明确