遗传毒性生物标志物的发现和探索——鼠内源性逆转录病毒中GLN家族和遗传毒性的关系及其生物学功能研究.pdfVIP

其它研究 是较强的致突变原和致癌原。国际癌症研究机构(IARC)2009年将其列为l类致癌物。代谢活 化在AA致突变和致癌过程中起着重要的作用。细胞色素P450(CYP)，尤其是肝脏CYP在药 物代谢增毒和减毒过程中起着重要昀作用。本实验室前期研究表明体内肝脏细胞色素P450可代 谢从减轻其肾毒性，但肝脏细胞色素P450在从诱发的遗传毒性中的作用还未有研究。本研 究建立全新的动物模型，目的是考察肝脏细胞色素P450在AA诱发遗传毒性中的作用，同时为 中药安全性评价和遗传毒性机制深入研究提供新思路和参考。 方法 利用gptdelta转基冈小鼠和肝脏细胞色素P450酶特异敲除小鼠(HepaticCYP_R_eductase delta转 —Nullmouse，HRN)，并建立上述两种小鼠杂交后的新模犁肝脏细胞色素P450缺陷犁gpt 基因小鼠(HRN／gpt)，考察AA给药后毒性靶器官内DNA加合物的生成情况，检测毒性靶器官 内的基因突变频率，结合AA及其代谢产物的血药浓度和组织分布检测结果考察肝脏P450酶代 谢对AA遗传毒性的影响。 结果 研究本研究结果表明，经口给予AA后，与野生型小鼠相比，HRN小鼠的AA血药浓度增 加，氧化产物减少，消除减慢，组织内AA原形和还原产物浓度增加。加合物检测结果表明， HRN小鼠肾脏内从一DNA加合物含量增加；经肝脏细胞色素P450 IA诱导剂p·萘黄酮 组织内AA原形和还原产物浓度减少，肾脏内从一DNA加合物含量减少。 基因突变检测结果表明，AA给药后，HRN／gpt小鼠肝脏和肾脏gpt基因点突变和gam基因 的缺失突变频率增加。突变谱分析结果表明，AT—TA是从诱发的主要点突变类型。缺失突变 主要以·1bp缺失为主。 结论 本论文利用模型小鼠证实肝脏细胞色素P450可代谢AA降低肾脏AA．DNA加合物形成和 基因突变频率，减轻AA的遗传毒性。 遗传毒性生物标志物的发现与探索——鼠内源性逆转录病毒 中GLN家族与遗传毒性的关系及其生物学功能研究 武元峰，栾洋，任进 中国科学院上海药物研究所药物安全评价与研究中心 上海市浦东新区海科路501号，邮编201203，电话0211303 遗传毒性评价是药物安全性评价中的重要组成部分，并参与到药物研发早期的毒性筛选。 利用分子生物标志物评价遗传毒性逐渐成为研究热点。本研究通过基因芯片方法筛选到一个未 知基因(BC005512)可以特异地被遗传毒性物质诱导，随后的研究表明该基因为鼠内源性逆转 录病毒(endogenous 转录病毒感染并整合入生殖细胞基因组而被后代遗传下来的产物。文献报道ERV中的一些家族 具有重要的生理功能或参与某些疾病的发生发展。最近的一项研究指出GLN的一个成员能够形 成感染性病毒颗粒，提示其在体内处于活性状态，但关于GLN的一般特征和功能研究很少。本 研究应用遗传毒性和分子生物学方法并结合生物信息学手段，对GLN与遗传毒性的关系及其生 259 其它研究 物学功能进行了深入的研究和探讨。 遗传毒性化合物的小鼠肝脏基因表达谱的差异．发现上述未知基因BC005512的表达能够特异地 被GTXs诱导。生物信息学分析结果表明该基冈为ERV中GLN家族的成员。即GTXs可以诱 real-time 导小鼠肝脏中GLN转录水平的表达，并利用实时荧光定量PCR(quantitativePC＆ qPCR)方法对芯片结果进行了验证。一般特征研究中，利用快速扩增eDNA末端(rapid of cDNA amplification 及基因克隆试验结果表明GLN在小鼠多种组织和细胞中均有表达，且不同组织或细胞中GLN 家族成员的表达谱不完全一致。 基于芯片结果，进一步的体外研究发现，多种不同作用机制的芯片试验中未检测的GTXs 能够诱导NIH／3T3细胞中GLN的表达，提示GLN对GTXs的反应具有较高的敏感性和特异性。 应用