培养基的配制与灭菌.ppt

一、实验目的 1、掌握培养基配制的一般方法与步骤。 2、了解常见的灭菌方式，掌握高压灭菌的原理及操作。 3、掌握基本实验器材的包扎。 （一）培养基的配制 培养基是由人工配制的能够满足微生物生长、繁殖或积累代谢产物所用的营养基质。 培养基的六大营养因素： 碳源 氮源 能源 生长因子 无机盐 水 热蒸汽 121℃, 25min 115℃, 35min 加水， 装锅，升压保压，降压与排气， 出锅， 烘干。 四、实验内容 牛肉膏蛋白胨培养基 固体 1L（500ml 三角瓶分装 X 3，每瓶加琼脂8克） 马丁氏培养基 固体 1L （500ml 三角瓶分装 X 3，每瓶加琼脂8克） 高氏一号培养基 固体 1L 同上 淀粉培养基 固体 1L 同上 葡萄糖蛋白胨水培养基 液体 5ml/试管 40 支 蛋白胨水培养基 液体 5ml/试管 40支 无菌水 9ml/支 30 支 无菌水 90ml/瓶 5 瓶 五、 思考题 1、简述高压灭菌锅的灭菌原理及使用注意点。 2、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌 后的培养基是无菌的？ 3、在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题？为什 么？ * * 实验三 培养基的配制与灭菌 二、实验原理 培养基的类型 据组成成分可分为: 1、合成培养基 2、天然培养基 3、半合成培养基 从培养基的物理状态可分为： 1、液体培养基 2、固体培养基 3、半固体培养基 据用途可分为： 1、基础培养基 2、加富培养基 3、选择培养基 4、鉴别培养基 实验基本流程： 设计，计算，准备 原料称量、溶解 调节pH 分装 （过滤澄清 ） 灭菌 塞棉塞和包扎 （摆斜面） 液体：试管 ?，三角瓶1/3 固体：三角瓶 1/2 （二）灭菌和消毒技术 1. 火焰灼烧：对金属器皿的灭菌 2. 干热灭菌：180℃2－3小时（对器皿的灭菌） 3. 湿热灭菌 常压蒸汽灭菌 ：巴氏消毒法，间歇灭菌法 蒸汽持续灭菌法 高压蒸汽灭菌： 121 ℃ 30分钟 4. 过滤除菌 5. 紫外线杀菌：紫外线照射20分钟以上，对空气杀菌 6. 化学药剂消毒和杀菌 高压蒸汽灭菌 三、实验材料 250ml、500ml三角瓶 15ml试管 培养基配制的化学药品和琼脂 棉花 报纸 10ml移液管，100ml量筒，500ml量筒，1000ml量筒各2个 1ml移液管5根 10N NaOH 孟加拉红水溶液 pH试纸 ，电炉，标签纸 ，玻棒，铝锅 ，天平