应用固定化里氏木霉同时产酶降解壳聚糖地研究.pdfVIP

应用固定化里氏木霉同时产酶降解壳聚槲的研究‘ 吴端斌夏黎明 陈育如 岑沛霖” (浙江大学生物化工系杭州 310027) 摘要采用多孔聚酯泡沫块固定化罩氏木霉RI，在鼓泡柱固定他反应器中同时产酶 降解壳聚糖。结果表明通过控制降解时『自J可以得到不同平均聚合度的降解物。在28℃， 酶活力平均达到0，15U／ml以上，壳聚糖平均降解率为72％以上。利用此固定化反应器， 在45天内连续进行15批同时产酶降解试验，结粜发现壳聚糖酶活和壳聚糖降解率能 保持稳定。 关键词里氏木霉，尉定化反应器，同时，壳聚糖酶生产，壳聚糖哞解 壳聚糖是主要由D．氨些葡萄糖以9．1，4键连接而成的多糖。壳聚糖在自然界中 主要存在于某些真菌的细胞壁中。但是，壳聚糖可以通过甲壳素脱乙酰大量得到。尽 管甲壳素资源丰富，但是很长一段时州驰它们的}蓝用受到j’忽视…。f近年柬，由于发现 壳聚寡糖具有抗细菌【”、抗真菌I”、抗肿瘤㈩以及免疫激活口I等一系列重要的生理作用． 它们的作用闩益引起人们的重视。壳聚：寡糖可以通过酸水解或酶降解的方法得到。酸 水解‘61作为传统的制备壳聚寡糖方法，}b于降解得率低、产物分离豳难以及环境污染等 问题，使其应用日益受到限制。而酶法降解Ⅲ通常包括壳聚糖的生产及壳聚糖降解两个 主要过程。由于各自在不同反应条件下进行总的生产周期较长，设备投资大，经济成 本较高。 在本工作中，我们将传统的酶法降解技术作了改进，把壳聚糖酶的生产和壳聚糖 的降解耦合在反应器中同时进行，并考察了反应器长期运行的稳定性。 】材料和方法 1．1菌株 罩氏木霹fTrichoderma刚聊，)R】，本实验室雠减，保存在PnA斜面上。 1．2培养基(g／L) 生长培养基：葡萄：|；；|{：lo，蛋白胍1 2．0， o l 3，吐温800，微最元素盐1 CaCl2．2H200．4，MgSO。．7H20 ml。p审用1M柠檬酸缓冲 1 1．4， 液调4．8。微量元素轱(g／L)：FeSO。．7H?O5n，MnS(Z，l七OJ6，ZnS04．7氆O 3．7。 CoCl2．6H20 20-，KH 营养限制培养基：可溶性壳聚糖m(脱乙酰度88，7％j 0．4， 2．0，CaCl2．H20 ?P94 ‘国家自然科学基金资助项口(No +·通讯联系人 MgS04．7H200．3，吐温801~2，微量元素盐1 mL，pH用1M醋酸缓冲液调4．8。 以上培养基都在121℃下灭菌30min。 1．3固定化反应器 定化反应器底板为直径为5ram的多孔筛板，筛孔分布均匀。反应器的工作体积在1．5～2L 之间。(如图l所示) 1．4里氏木霉R1的固定化和壳聚糖的降解 以多孔聚酯泡沫(空隙率火于90％)一“m 为载体，吸附固定里氏木霉菌丝_寄多孔聚 。：≯一 酯泡沫切成2X 1×lcm大小丈t每升培。。，“．IL。一，j』，。。。．。 养基加入69载体。按10％(V／V)的比例接|滢!裂b。，J。。kct 一 入里氏木霉R1的孢子悬液，使尘比培养 f≮．ti) 。’一m…c 基中的孢子浓度达到106个]ml。然后在30f’—。9翠二 ℃、通气量1．5～2vvm条件下培养。至菌 flliBB