圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因——sanJ的克隆及功能研究.pdfVIP

遗传学报．28(2)：188～195，200 ^cmGenedcqSinieⅡ 圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因 ——舰乃t，的克隆及功能研究 聂丽平1～，田字清1，谭华荣‘① (I中国科学院微生物研究所，北京100(180；2辽宁师范大学生物系．大连116029) 摘要：以尼可霉索生物台成相关的基因片段为探针，从圈卷产色硅霉菌cosmid基因文库中筛选 到1个大约7 分析，结果表明，23kb的SolI一8amHlDnn片段中含有1个完整的开放阅读框．起始密码子 为27l位的GIG，终止密码子为1954位的TGA，该基因的大小为1686bp，编码1个太小为561 个氨基酸的蛋白质产物。利用blajstx程序在蛋白质数据库中进行同源比较，结果揭示此基因产 物与腺苷酸形成酶超家族的连接酶有44％的一致性．此外，该基因的破坏导致圈卷产色链霉菌 尼可霉紊生物台成能力的丧失，证明它是尼可霉索生物合成所必需的，命名其为sanJ。 关键词：圈卷产色链霉菌；尼可霉紊；生物合成；腺苷酸形成酶 中圈分类号：Q75 文献标识码：A 文章编号：0379—4172(2001)02--0188-08 近20年来，链霉菌(51。ireptorrqcessp)的分子遗传学研究发展迅速…，取得了一系列重 要的进展，已成为现代生物学中一个新的研究热点。因为，链霉菌不仅具有复杂的形态分 化周期，是研究原核生物形态分化的良好模式材料01；同时，链霉菌还具有独特的生理分 化周期，可以产生种类繁多的抗生素和次级代谢产物；在已知的大约12000种抗生素中， 70％左右是由链霉菌产生的，其中包括许多在人类医药和工农业生产上具有重要应用价 值的抗生素，它们在人类生活中的重要意义是不言而喻的，已知，大多数抗生素的生物合 成途径是十分复杂的，这些途径往往涉及到一系列成族排列的基因的时空表达【3】。在链霉 菌中，抗生素的生物合成基因的表达由途径特异的调控因子和全局性调控系统共同控制； 各种调控作用彼此独立又相互影响构成了一个复杂的多水平的调控网络“’5】。因此，在分 子水平上阐明链霉菌抗生素生物合成基因的结构与功能及其表达调控的机理，可为新型 药物的开发和高效率的发酵工艺的建立提供有价值的理论依据。 圈卷产色链霉菌(Streptomyces 尼可霉素是几丁质合成酶底物IIDpN一乙酰葡萄糖胺的结构类似物，对几丁质合成酶具 收稿日期：2000-06—27；謦订日期：2000-08—16 基金项目国家自然科学基金重点项目(N及国家杰出青年基金项目(No 作者筒介：聂丽平(196I)，女．副教授，研究方向：分子遗传学 ①联系人 万方数据 2期 聂丽平等：囤卷产色链霉菌尼可霉索生物合成基因——j。“，的克隆及功能研究 189 有强烈的竞争性抑制作用161；因此，表现出高度的抗真菌、抗昆虫和抗螨虫活性。此外，由 于尼可霉素对蜜蜂及哺乳动物几乎无毒性，而且在自然界中极易降解，因此是一种比较理 想的农用抗生素。作为抗真菌药物，尼可霉素在人类深部真菌感染的治疗中也有良好的 应用前景， 目前，有关尼可霉素生物合成基因的研究已经取得了一些初步的进展”1，但是，完整 生物合成途径的阐明还依赖于更多的生物台成基因的发现和基因间相互关系的研究。最 段；功能研究表明，该DNA片段与尼可霉素生物合成密切相关。在本实验中，采用染色体 结构和功能进行了初步的研究。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1菌株和培养基 7loo)，E 圈卷产色链霉菌7100(Sweptoraycesansochromogenes cotiDH5口和Ecoli M13．pKCl139及重组质粒pCWl8(M1 7100 co,mid文库由本室构建并保存。赤星灰霉由本所宋幼新研究员赠送。 1．12培养基 基本培养基均按文献[8]配制。 l l 3工具酶和生化试剂 士赠送。PEGl000购于Merck Mannheim公司。DEAEDE81滤纸购于Whatman公司。 1．2方法 1．2．1 常规的微生物学和分子生物